ExiProgen™ ProXpress PCR Template kit

ExiProgen™ ProXpress PCR Template Kit는 ExiProgen™으로 단백질을 합성하기 위한 template DNA를 cloning 과정 없이 PCR 반응으로 제작할 수 있는 키트입니다. 

₩350,000
In stock
SKU
K-7400-CFG

Template DNA로부터 재조합 단백질을 전자동으로 합성할 수 있는 장비인 ExiProgen™ 과 ExiProgen™ ProXpress PCR Template Kit를 이용한 단백질 합성 시스템은 가장 빠르게 원하는 단백질을 만들어 낼 수 있기 때문에 유전자 기능연구와 단백질 연구의 혁신적인 연구방법입니다. 16종의 새로운 단백질을 만들기 위해 오전 9시에 PCR로 template 제조를 시작하여 오후 5시에 완성하여 ExiProgen™에 장착하여 가동시키고 퇴근하면, 다음날 아침 16종의 90 % 이상 순도의 단백질을 얻을 수 있습니다. 이 시스템은 무세포 단백질 발현법과 affinity 정제법을 이용하여 단백질을 합성할 수 있는 시스템으로서 연구자들이 수많은 유전자 정보로부터 가치 있는 단백질을 발견하는데 필수불가결한 신개념의 시스템입니다.


이 키트를 사용하여 template DNA를 얻는 과정은 두 단계로 진행됩니다.

1) 1차 PCR : 합성하려고 하는 단백질의 structural gene 을 포함하고 있는 DNA (cDNA, genomic DNA, plasmid 등)로부터 합성하려고 하는 coding region 을 extended primer를 사용하여 PCR로 증폭합니다. (ordering information 참조)

2) 2차 Overlapping PCR : 1차 PCR에서 확보된 target gene(coding region)의 5'쪽 말단에 T7 promoter 및 RBS 서열을 연결하고 3'쪽 말단에 T7 terminator 서열을 연결하는 overlapping PCR 을 거쳐서 얻은 최종 template DNA 를 gel purification 하여 얻을 수 있습니다.

Features and Benefits

Protein synthesis(expression and purification) without cloning within 1 day
cDNA, genomic DNA 등으로부터 두 단계의 PCR 반응만을 통해 7시간 안에 단백질 합성을 할 수 있는 고효율의 template DNA를 확보할 수 있으며, 이 DNA와 ExiProgen™을 이용하여 단 하루만에 원하는 단백질을 합성할 수 있습니다.

Easy-to-Use
본 제품에는 단백질 발현용 template DNA 제작을 위한 모든 구성 요소가 포함되어 있으므로, target gene 증폭을 위한 primer set만 준비하시면 됩니다.

Accurate protein template by high fidelity PCR
본 제품은 당사의 대표적인 Long & high fidelity PCR PreMix인 AccuPower® ProFi Taq PCR PreMix를 제공하여, PCR 반응시 생길 수 있는 error rate를 줄여주기 때문에 정확한 sequence를 가진 단백질 발현용 template DNA 를 제작할 수 있습니다.

High efficiency
본 제품을 이용하여 제조한 단백질 발현용 template는 ExiProgen™에 최적화되어 소량의 DNA 만으로도 100 μg 이내의 단백질을 합성할 수 있습니다.
(ex) Template 길이에 따른 DNA 최적량: 1 kb 이하 – 500 ng, 1~2 kb - 1 μg)


ExiProgen™ ProXpress PCR Template Kit는 PCR 을 이용해서 빠른 시간 내로 단백질 발현용 template DNA를 제작할 수 있는 키트입니다. 이 키트를 사용하여 template DNA를 얻는 과정은 두 단계로 진행됩니다. 상세한 실험 과정 및 template의 구조는 다음과 같습니다.


(A) 단백질 합성을 위한 primer 주문
당사의 ExiProgen™ ProXpress PCR Template Kit용 primer sets를 주문하시면 최적의 단백질 발현을 위한
1차 PCR 용 primer sets 를 48시간 내로 배송해 드리며, 주문은 [Ordering Information]에서 하실 수 있습니다.

     ① 상기 예시와 같이 Forward primer 는 target gene의 5' 말단부터 18 mer (ATG codon 포함 안함),
     Reverse primer 는 target gene의 3' 말단부터 18 mer (역방향 서열, Stop codon 포함 안함)로 디자인 합니다.
     ② 6x Histidine tag의 위치를 선정합니다.
     ③ Ordering information에서 tag의 위치에 맞는 [1차 primer F/R sets]를 주문합니다.
     ④ 주문하신 [1차 primer F/R sets]는 primer의 각 5' 말단에 21 mer의 서열을 추가로 도입하여
     제작된 상태로 공급해 드립니다.

(B) 1 차 PCR 반응 : 주문한 primer sets와 kit 내에 포함되어 있는 AccuPower® ProFi Taq PCR Premix를 사용하여 1차 target gene 증폭



(C) 2 차 Overlapping PCR 반응 : 1차 PCR 반응물을 주형으로 하여, kit 내에 포함되어 있는 primer sets 와 cassette sets를 이용하여 단백질 합성용 template 제작



(D) ExiProgen™ ProXpress PCR Template Kit로 합성한 template DNA의 구조

Experimental Data

1. Template 확보 (2차 Overlapping PCR products)


Figure 1. Synthesis of linear template DNA with ExiProgen™ ProXpress PCR Template Kit.
Each sample is loaded 100 ng on 1% TBE agarose gel.
M1; 100bp DNA Ladder(Bioneer, D-1030), 1; SAV (0.6kb Template – pT), 2; RNase H (0.7kb, Template – BL21(DE3) gDNA), 3; hGH (0.8kb, Template – pT), 4; CAT (0.9kb, Template - pBIVT), 5; UDG (0.95kb, Template - BL21(DE3) gDNA), 6; AcGFP (0.97kb, Template – pBIVT ), 7; EVO (1kb, Template –pT), 8; RFP (1kb, Template – pIVEX), 9; Poly A polymerase (1.6kb, Template – pET15b),M2; 1kb DNA Ladder(Bioneer, D-1040)

2. ExiProgen™ EC Protein Synthesis Kit를 이용한 단백질 합성

Figure 2. Synthesis of proteins with ExiProgen™.
Each linear template DNA generated by ExiProgen™ ProXpress PCR Template Kit and those are used as template for protein synthesis with ExiProgen™ EC Protein Synthesis Kit.
M; AccuLadder™ Protein Size Marker (Low)(Bioneer, D-2020), 1; SAV (13 kDa), 2; RNase H (20 kDa),3; hGH (23 kDa), 4; CAT (26.5 kDa), 5; UDG (28 kDa), 6; AcGFP (28 kDa), 7; EVO (30 kDa), 8; RFP (31kDa), 9; Poly A polymerase (54 kDa)

Cat. No. Product Description Price
K-7400 ExiProgen™ ProXpress PCR Template kit, 16 reactions ₩350,000
K-7401 ExiProgen™ ProXpress PCR Template kit, 32 reactions ₩600,000
N-8229 1차 primer F/R sets (N terminus 6x His tag), each 5nmole ₩35,000
N-8230 1차 primer F/R sets (C terminus 6x His tag), each 5nmole ₩35,000

  1. 합성하고자 하는 단백질의 6x histidine tag 위치를 결정한 후, 해당되는 제품의 버튼을 누릅니다.
  2. 화면 하단에 있는 중 결제하고자 하는 방식의 버튼을
    누릅니다.
  3. [기타정보]란에 forward primer와 reverse primer의 서열을 입력합니다.

    • Note 1) 각각의 primer는 18 mer로만 주문이 가능하나, 만약 18 mer 이상을 주문하시고자 하는 경우에는
      OLIGO팀(042-930-8617)으로 문의하여 주시기 바랍니다.
    • Note 2) Primer sets가 여러 개인 경우에는 Gene 이름과 함께 기록해주시면 됩니다.
  4. 입력이 끝난 후, 결제하기 버튼을 누르시면 됩니다.
Copyright © 2018 BIONEER CORPORATION. All rights reserved.