HotStart DNA Polymerase

항체를 사용하여 Polymerase를 불활성화 시켰던 기존의 HotStart 방법과는 달리, PCR반응에 필수적인 2가 양이온(Mg2+)을 불활성화 시키는 피로 포스페이트(pyrophosphate, PPi)와 80℃에서 활성을 갖는 내열성 pyrophosphatase(PPase)를 사용한 신 개념의 HotStart DNA Polymerase 입니다.

₩90,000
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E-3150-CFG

New concept by chemical method

Pyrophosphate (PPi)와 pyrophosphatase (PPase)의 화학반응을 이용한 신개념의 HotStart DNA Polymerase

enzyme Hotstart figure1

일반적인 PCR 반응 성분 중에서 Mg2+는 DNA polymerase의 activity에 중요한 역할을 합니다. PCR 반응액에 PPase와 PPi를 넣어주면 PPi는 Mg2+와 결합하여 Mg2+-PPi complex를 형성하여 PCR 반응을 저해하게 되어 PCR 초기 단계에서 발생하는 비특이 반응을 방지합니다. PCR 반응 시, PCR 반응액이 70℃ 이상이 되면 활성화된 PPase가 PPi를 2Pi로 분해하고 Mg2+을 해리시켜 정상적인 PCR 반응이 진행됩니다. 또한 PPase는 반응 부산물인 동시에 PCR 저해제인 PPi를 2Pi로 분해함으로써 PCR 반응성을 증가시키는 효과도 있습니다. 또한 항체를 사용하지 않기 때문에 별도의 항체 제거 step이 필요하지 않아 PCR 반응 시간을 단축시키는 장점을 가지고 있습니다.

 

Features and Benefits

High Sensitivity and High Specificity:
상온에서의 DNA polymerase 활성을 완벽하게 억제하였기 때문에 PCR 반응물을 혼합하는 동안 형성될 수 있는 비특이 반응묾이나 primer-dimer의 생성을 억제할 수 있습니다.

Improve Product Yields:
높은 sensitivity와 specificity로 인해 target DNA의 yield를 향상시킬 수 있습니다.

Reproducibility: 
재현성 있는 결과를 위해 바이오니아의 전 제품은 one batch에서 대량생산되고 엄격한 ISO 품질 검사를 통해 항상 균일한 품질을 보증합니다.



Enzyme Properties

5' to 3' exonuclease activity: No
3' to 5' exonuclease activity: No
3' – A overhang: Yes
Fragment size: Up to 12 kb


Applications

HotStart PCR, PCR with complex genomic templates/low copy templates/cDNA
Multiplex PCR
Primer extension
SNP typing
Real-time PCR using SYBR Green dye
Multiple primer pairs and amplification of low copy template DNA


Reagents Supplied

10X reaction buffer : Tris-HCl, KCl, Pyrophosphate, pH 9.0
1X dilution buffer : 50% glycerol containing 50 mM Tris-HCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, stabilizers, pH 8.2
dNTP mix : 2.5 mM of each dNTP
20 mM MgCl2


Concentration

250 U/50 μl


Storage Conditions

50% glycerol containing 20 mM Tris-HCl, 0.5 mM EDTA, 1 mM DTT, 100 mM KCl, stabilizers, pH 8.0


Store Temperature

-20°C


Unit Definition

One unit is defined at the amount of enzyme that will incorporate 10 nmole of dNTP into acid-insoluble material in 30 minutes at 72°C.

Experimental Data

enzyme Hotstart figure1

Figure 1. Multiplex PCR comparison of genomic DNA using 6 sets of primers and 2 different DNA polymerases.


Lane M; 100 bp DNA Ladder (D-1030)
Lane 1; 750 bp fragment
Lane 2; 590 bp fragment
Lane 3; 450 bp fragment
Lane 4; 360 bp fragment
Lane 5; 260 bp fragment
Lane 6; 150 bp fragment
Lane 7; Multiplex PCR with primers used for Lane 1 – 6




Cat. No. Product Description Price
E-3150 HotStart DNA Polymerase, 250 U, with dNTPs ₩100,000
E-3150-1 HotStart DNA Polymerase, 250 U, without dNTPs ₩90,000
E-3151 HotStart DNA Polymerase, 1000 U ₩350,000










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