AccuPower® Salmonella spp. 4-Plex PCR Kit

AccuPower® Salmonella spp. 4-Plex PCR Kit (RUO)는 가축의 분변 및 회장에 감염된 살모넬라 공통유전자 (InvA)와 3종의 혈청형 (S. Enteritidis, S. Typhimurium 그리고 S. Choleraesuis)을 동시에 검출하는 정성검사용 유전검사시약입니다.
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카탈로그 번호
MSE-1115

AccuPower® Salmonella spp. 4-Plex PCR Kit          (RUO)

사람과 가축의 분변 및 회장에 감염된 살모넬라 공통유전자 (InvA)와 3종의 혈청형 (S. Enteritidis, S. Typhimurium 그리고 S. Choleraesuis)를 동시에 검출하는 정성검사용 유전검사용시약


Description


 살모넬라 식중독은 살모넬라균에 오염된 식품을 섭취하여 감염에 의해 발생하는 급성 또는 만성의 소화기 전염병으로, 주로 송아지 와 돼지에서 다발하며, 그 증상으로는 발열, 위장염, 패혈증을 보입니다.
 
 살모넬라균에 감염된 동물과 직접 접촉 또는 식육을 통하여 발생함으로써 공중보건학적으로 매우 중요한 질병입니다.
 
 2,500개 이상의 살모넬라 혈청형 중에 S. Enteritidis(SE), S. Choleraesuis(SC), S. Typhimurium(ST)이 전 세계적으로 사람과 가축에 질병을 일으키는 주요 병원체입니다.
 
 S. Enteritidis(SE)는 국내에서 가장 빈번하게 분리된 살모넬라 혈청형으로, 숙주범위가 매우 넓어 사람뿐 만 아니라 가금류 및 포유동물에도 감염되어 질병을 유발합니다.
 
 S. Choleraesuis(SC)는 사람에게 잘 감염되지 않지만, 감염되면 심한 전신패혈증을 일으키는 매우 치명적인 병원균입니다.
 
 S. Typhimurium(ST)은 숙주의 특이성이 없어 축종에 상관없이 감염되며, 식육을 통해 사람에게도 식중독을 유발시키는 인수공통 원인균입니다.
 
 S. Enteritidis(SE)는 S. Typhimurium(ST)과 Salmonella derby등과 함께 돼지에게 급성 및 만성 장염을 일으키는 원인균 중의 하나입니다. 또한, 양계장 닭의 분뇨에 의해 오염된 계란 껍질에 서식하며 증식하여 식중독을 일으킵니다.
 

구분 AccuPower® Salmonella
spp. 4-Plex PCR Kit
동물질병표준검사법
(농림수산검역검사본부)
I 사 K 사
공통 InvA + (검출) + (검출) + (검출) + (검출)


S. Enteritidis + (검출) - (검출불가) - (검출불가) - (검출불가)
S. Choleraesuis + (검출) - (검출불가) - (검출불가) - (검출불가)
S. Typhimurium + (검출) - (검출불가) - (검출불가) - (검출불가)
비고 3개 혈청형 감별
PreMix 건조키트
혈청형
감별불가

 
 
 
Features and Benefits
 
농림수산검역검사본부(QIA)와 (주)바이오니아 연구진이 공동연구로 개발(특허출원).

 신속성
살모넬라 공통유전자(InvA)와 3종의 혈청형 ST(S. Typhimurium), SC(S. Choleraesuis), SE (S. Enteritidis)를 단일 Tube안에서, 한 번의 2-step PCR 반응을 통해 검출하므로 Running time을 2시간 이내로 단축하였습니다.
 
 최적의 민감도 및 특이도
농림수산검역검사본부 보유 야외분리균주 111개에 대한 검증을 완료하였습니다. 특허 받은 Enzyme-mediated HotStart 기술 적용으로, 최적 민감도 1 x 104 CFU/ml로 맞추어 False Positive를 최대한 배제하였습니다.
 
 뛰어난 재현성 
건조형식의 Hotstart PCR Premix type으로 Template DNA와 D.W만 첨가하므로, 재현성높은 검사결과를 제공합니다.
 
 Amplicon에 의한 교차오염 방지
DNA 이중나선과 공유결합을 하는 8-MOP(8-methoxypsoralen)이 첨가되어, PCR 반응물을 UV로 조사함으로써 Amplicon에 의한 교차오염 방지가 가능합니다.
 
 보관온도 및 안정성
-20℃에서 2년의 유효기간 보장.
 
 품질인증
모든 Bioneer Accupower® 제품은 ISO 9001 품질시스템하에서 제조됩니다.

Specifications

Target InvA gene (Salmonella common gene), S. Choleraesuis(SC), S. Typhimurium (ST), S. Enteritidis(SE)
Instrument MyGenie™ 96 Gradient Thermal Block 또는 타사 Thermal Block
Specimen Feces small and large intestines septicemia urine other svstemic organs
Time to result 2 hours (Post-extraction)
Tests per Kit 48




Experimental data

살모넬라 공통유전자(InvA)와 3종의 혈청형 [S. Enteritidis(SE), S. Choleraesuis(SC) & S. Typhimurium(ST)]을 동시에 검출합니다. QIA의 동물질병표준검사법과 타사제품은 혈청형을 검출할 수 없습니다.

Figure 1. AccuPower® Salmonella spp. 4-Plex PCR Kit 성능실험
AccuPower® Salmonella spp. 4-Plex PCR Kit를 이용하여, 총 6 ng의 Genomic DNA [표준균주 ATCC 13076(S. Enteritidis), ATCC 7001(S. Choleraesuis) & ATCC 14028(S. Typhimurium) 각 2 ng]를 95℃ 5 min, 95℃ 30 sec 65℃ 1 min 30 sec(30 cycles), 72℃ 5 min조건으로 PCR 반응을 진행하였습니다. 3 μl PCR 반응산물을 2% TBE Agarose 젤에서 전기영동하였습니다.
Lane P: S. Enteritidis Genomic DNA, S. Typhimurium Genomic DNA & S. Choleraesuis Genomic DNA mix
Lane M: 100bp DNA Ladder (D-1030)
Lane N: No Template Control
Amplicon size: InvA 843bp, SE 627bp, ST 307bp & SC 409bp
  

 
야생시료 20종에 대한 특이도 실험에서, QIA의 동물질병표준검사법과 타사제품들은 혈청형을 구분할 수 없습니다(AccuPower® Salmonella spp. 3-Plex PCR Kit 결과 참조). AccuPower® Salmonella spp. 4-Plex PCR Kit만 InvA와 3종의 혈청형 (SE, SC & ST) 모두를 검출합니다.

Figure 2. 야생시료 20종에 대한 타사제품 및 동물질병표준검사법과의 특이도 비교실험
AccuPower® Salmonella spp. 4-Plex PCR Kit와 QIA의 동물질병표준검사법 그리고 국내 I사와 K사 키트를 이용하여, Genomic DNA 6 ng을 95℃ 5 min., 95℃ 30 sec. 65℃ 1 min 30 sec(30 cycles), 72℃ 5 min로 PCR 반응을 진행하였습니다 [QIA의 동물질병표준검사법과 타사제품 (I사 & K사)들은 각각 권장조건으로 PCR 반응을 진행하였습니다. QIA의 동물질병표준검사법: 95℃ 5 min., 94℃ 1 min 54℃ 30 sec 72℃ 30 sec(35 cycles), 72℃ 10 min, I사: 94℃ 5 min, 94℃ 30 sec 50℃ 30 sec 72℃ 40 sec(40 cycles), 72℃ 5 min , K사: 95℃ 12 min, 94℃ 30 sec 63℃ 30 sec 72℃ 30 sec(35 cycles), 72℃ 10 min]. 3 μl PCR 반응산물을 2% TBE Agarose 젤에서 전기영동하였습니다.
Lane 1, 5, 9, 10, 14, 16 & 17: S. Typhimurium (307bp)
Lane 2, 3, 7, 15 & 19: S. Enteritidis (627bp)
Lane 8, 12 & 18: S. Cholerasuis (409bp)
Lane 4: S. Rissen
Lane 6: S. Montevideo
Lane 11: S. Schwarzengrund
Lane 13: S. Gallinarum
Lane 20: S. Derby
Lane M: 100bp DNA Ladder (D-1030)
Lane N: No Template Control

 

 
최적의 민감도 1X104 CFU/ml 까지 검출할 수 있습니다.


Figure 3. AccuPower® Salmonella spp. 4-Plex PCR Kit에 대한 민감도실험
총 6 ng의 Genomic DNA(균주 SE, ST & SC각 2 ng)를 95℃ 5 min, 95℃ 30 sec 65℃ 1 min 30 sec(30 cycles), 72℃ 5 min 조건으로 PCR 반응을 진행하였습니다. 3 ul의 PCR 반응산물을 2% TBE Agarose 젤에서 전기영동하였습니다.
Lane 1: 1x108 CFU/ml
Lane 2: 1x107 CFU/ml
Lane 3: 1x106 CFU/ml
Lane 4: 1x105 CFU/ml
Lane 5: 1x104 CFU/ml
Lane 6: 1x103 CFU/ml
Lane 7: 1x102 CFU/ml
Lane M: 100 bp DNA Ladder (D-1030)
Lane N: Negative control

 

 
장내유사세균 15종에 대한 특이도 실험에서, QIA의 동물질병표준검사법과 타사제품은 비특이반응으로 특이도가 낮습니다. AccuPower® Salmonella spp. 4-Plex PCR Kit만 비특이 반응없이, 위양성 검증을 완료하였습니다.

Figure 4. 장내 유사세균 15종에 대한 각 제품별 특이도 실험
다양한 장내유사세균 유래 Genomic DNA 4 ng을 Accupower® Salmonella spp. 3-Plex PCR Kit, QIA의 동물질병표준검사법 그리고 국내 K사 키트를 각각의 권장조건으로 PCR 반응을 진행하였습니다 [I: 95℃ 5 min., 95℃ 30 sec. 65℃ 1 min 30 sec(30 cycles), 72℃ 5 min, II: 95℃ 5 min., 94℃ 1 min 54℃ 30 sec 72℃ 30 sec(35 cycles), 72℃ 10 min, III: 95℃ 12 min., 94℃ 30 sec 63℃ 30 sec 72℃ 30 sec(35 cycles), 72℃ 10 min]. 3 ul PCR 반응산물을 2% TBE Agarose 젤에서 전기영동하였습니다. 
Lane 1: Acinetobacter lwoffii genomic DNA
Lane 2: Enterococcus fecalis genomic DNA
Lane 3: Maltophilia genomic DNA
Lane 4: Pseudomonas putida genomic DNA
Lane 5:
Proteus mirabilis genomic DNA
Lane 6:
Citrobacter freundii genomic DNA
Lane 7:
Klebsiella pneumonia sub. genomic DNA
Lane 8:
Enterobacter cloacae genomic DNA
Lane 9:
Acinetobacter haemolyticus genomic DNA
Lane 10:
Comamonas testosterone genomic DNA
Lane 11:
Clostridium perfrigens alpha genomic DNA
Lane 12:
Burkholderia cepacia genomic DNA
Lane 13:
Ochrobactrum anthropi genomic DNA
Lane 14:
Serratia marcescens genomic DNA
Lane 15:
Acinetobacter junii genomic DNA
Lane M: 100 bp DNA Ladder (D-1030)
Lane N : Negative control

Manual

• Manual_AccuPower® Salmonella spp. 4-plex PCR Kit


MSDS

AccuPower® Salmonella spp. 4-Plex PCR Kit


Brochure

AccuPower® Veterinary Diagnostic PCR Kit - Brochure


Quality Assurance

Bioneer is the holder of Quality Management System Certificates for the following standards.


ISO 9001 – certificate

EN ISO 13485 - certificate

EC Directive 98/79/EC - certificate


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