AccuPower® Theileria PCR Kit

가축에 감염된 혈액을 이용하여, 16종의 범안열원충의 감염여부를 진단하는 정성검사용 고위험성동물전염병유전검사용시약 (제 090-010 호)

₩350,000
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THE-1115
Description

 사람이나 동물의 적혈구에 기생하는 범안열원충(Theileria)은 주로 열대와 아열대지방에서 분포하였으나, 최근 지구기온이 증가하는 지구 온난화 현상에 의해 전세계적으로 확산되고 있습니다.
 
 범안열원충성 질병은 전 세계적으로 분포되어 있는 가축 주혈원충성 질병으로, 국내에 가장 많이 존재하는 3 숙주성 진드기에 의해 매개됩니다.
 
 국내 감염율은 70~100% 정도로 심한편이고 발병율은 30~50% 정도가 보고되어 있습니다.
 
 감염된 경우 평생 동안 보균가축으로 남아 전파체 역할을 하게 되므로, 축산농가에 커다란 피해를 가져올 수 있습니다.
 
 범안열원충성 질병은 감염 후 1∼4주가 지나면 용혈로 인한 빈혈, 피로감, 식욕감퇴, 두통, 고열, 오한 등의 증상이 나타나며, 특히 면역력이 약화된 동물이 감염되는 경우 치명적인 상황을 초래하기도 합니다.
 
AccuPower® Theileria PCR Kit G사 (Germany) B사 (Chile)
범안열원충 15종 검출 개별 단독검출
(T. annulata)
개별 단독검출
(T. annulata, T. ovis, T.lesto, T. guardi, T parva)
 
 
 
Features and Benefits
 
농림수산검역검사본부(QIA)와 ㈜ 바이오니아 연구진이 공동연구 개발(특허출원).

 최고성능
15종 범안열원충을 동시 진단.

범안열원충
(15 species)

Theileria annulata, Theileria buffeli, Theileria cervi, Theileria equi, Theileria mutans, Theileria orientalis, Theileria ovis, Theileria parva, Theileria separata, Theileria sergenti, Theileria sinensis, Theileria taurotragi, Theileria uilenbergi, Theileria velifera & Theileria youngi 
 
 최적의 민감도 및 특이도:
특허받은 Enzyme-mediated HotStart 기술적용으로 False positive를 최대한 배제하였습니다. 10 copies까지의 높은 민감도를 제공합니다.
 
 뛰어난 재현성

건조형식의 Hotstart PCR Premix type 으로 Template와 D.W만 첨가하므로, 재현성높은 검사결과를 제공합니다.
  
 Amplicon 오염 방지:

DNA 이중나선과 공유결합을 하는 8-MOP(8-methoxypsoralen)을 첨가하여, PCR 반응물을 UV로 조사하여 Amplicon에 의한 교차오염 방지가 가능합니다.
 
 보관온도 및 안정성 

-20℃에서 2년의 유효기간을 보장합니다.
 
 품질인증:

모든 Bioneer Accupower® 제품은 ISO 9001 품질시스템하에서 제조됩니다.
Specifications
 
Target Theileria genus (가축기생충 - 범안열원충)
Instrument MyGenie™ 96 Gradient Thermal Block 또는 타사 Thermal Block
Specimen Whole blood
Time to result 100 mins(Post-extraction)
Tests per Kit 96
 
 
 
Experimental data
 
AccuPower®Theileria PCR Kit는 최적 민감도 10 copies 와 특이도 검사를 완료하였습니다.

Figure 1. AccuPower® Theileria PCR Kit의 민감도 및 특이도 검사

(A)민감도 검사는 양성대조군 범안열원충(Theileria genus) Genomic DNA를 10배씩 순차희석 (시료 1 ~ 5는 105 ~ 10 copies)하여 준비하였고, 95℃ 5 min, 95℃ 20 sec 65℃ 35 sec(40 cycle), 72℃ 5 min조건으로 PCR 반응을 진행하였습니다. 5 μl PCR 반응산물을 2% TBE Agarose 젤에서 전기영동하였습니다.
(B)특이도 검사는 2종의 바베스열원충(Babesia giboni & Babesia ovata, Lane B1 과 B2) Genomic DNA와 가축(Bovine & Dog) 정상혈액의 Genomic DNA를 이용하였습니다. 시료 6, 7, T1 & T2는 105 copies를 준비하였습니다. 95℃ 5 min, 95℃ 20 sec 65℃ 35 sec(40 cycle), 72℃ 5 min 조건으로 PCR 반응을 진행하였습니다. 5 μl PCR 반응산물을 2% TBE Agarose 젤에서 전기영동하였습니다. 
 
AccuPower® Theileria PCR Kit 는 동물표준질병검사법과 비교검증을 완료하였습니다.

Figure 2. AccuPower® Theileria PCR Kit와 동물질병표준검사법(농림수산검역검사본부, QIA) 비교실험

AccuPower® Theileria PCR Kit (A)와 동물질병표준검사법(QIA)내의 Theileria sergenti primer set (B)을 이용하여, 양성대조군 범안열원충(Theileria genus) Genomic DNA를 10배씩 순차희석(시료 1 ~ 5는 105 ~ 10 copies)하여 이용하였습니다. 반응조건은 각각의 권장조건에 맞추고 동일 반응주기로 하여 PCR 반응을 진행하였습니다.
A : 95℃ 5 min., 95℃ 30 sec 65℃ 30 sec(35 cycle), 72℃ 5 min / B : 96℃ 15 min, 96℃ 30 sec 60℃ 1 min 72℃ 1 min(35cycle), 72℃ 10 min]. 5 μl PCR 반응산물을 2% TBE Agarose 젤에서 전기영동하였습니다.
 
야생시료 476종에 대한 가축위생시험소 시험사업에서 AccuPower® Babesia & Theileria PCR Kit가 특이도 실험에 사용되었습니다.

Figure 3. 야생시료 476종에 대한 AccuPower® Babesia & Theileria PCR Kit 특이도 실험(일부 예)

가축위생시험소로부터 Genomic DNA를 분양받아 특이도 실험을 시행하였습니다. Genomic DNA 2 μl를 첨가하여, 95℃ 5 min, 95℃ 20 sec 59℃ 50 sec(40 cycle), 72℃ 5 min 조건으로 PCR 반응을 진행하였습니다. 3 μl PCR 반응산물을 2% TBE Agarose 젤에서 전기영동하였습니다.
Lane 1 ~ 424: Wild type DNA (야생시료)
Lane PC1 & PC2: 양성대조군
Lane N: Negative control
Lane M: 100bp DNA Ladder(D-1030)

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