S. cerevisiae VN-fusion Library Individual Strains (Glycerol type)

Yeast genome-wide protein-protein interaction libraries

본 제품은 형광단백질을 N-말단 및 C-말단 절편으로 나눈 후 상호작용을 알아보고자 하는 두 단백질에 부착하여 발현되게 한 다음, 두 단백질이 상호작용을 하기 위해 가까워질 경우 형광단백질의 두 절편이 합쳐져 온전한 형광단백질이 형성될 때 나타나는 형광을 분석하는 방법 (이분자 형광 상보 기법)을 이용하여 개발되었습니다. 그리하여 살아있는 세포에서 단백질 상호작용 확인이 가능하며 상호작용이 일어나는 세포 내 위치까지 분석할 수 있다는 장점을 가지고 있습니다. 현재 yeast proteome의 약 93% 확보하여 5,809개의 VN-tagged Open Reading Frames (ORFs)으로 구성되어 있으므로 실험 목적에 맞는 유전형의 균주를 각각 선택하여 실험에 사용하실 수 있습니다.

₩200,000
카탈로그 번호
V-1010VN-G

특장점

  • 살아있는 세포 내에서 단백질 상호작용과 세포 내 위치 분석이 가능

  • Fluorescent complex 형성 시 강한 형광 signal이 발산되어 형광 현미경만으로 간단하게 관찰 가능

  • 단백질의 상호 작용을 유전체적 수준에서 분석 가능 (93%의 yeast proteome을 커버)

  • 알려지지 않은 새로운 단백질의 기능 및 상호작용 연구에 용이

  • Proteinylation 분석 가능 (ubiquitination, sumoylation, neddylation 등)

개요

서울대 허원기 교수팀이 개발하고 바이오니아가 보유한 S. cerevisiae VN-fusion library는 in vivo 상에서 단백질 간의 상호작용을 형광 시그널을 통해 보다 간편하게 알아볼 수 있는 시스템입니다. VN-fusion library는 총 5,809개의 VN-tagged Open Reading Frames (ORFs) 로 구성되어져 있으며 S. cerevisiae 전체 게놈의 93%를 포함하고 있습니다.

원리

이분자 형광 상보 기법 (bimolecular fluorescence complementation; BiFC) Assay

대부분의 생명 현상은 단백질간의 상호작용으로 이루어집니다. 따라서 이들의 상호작용을 이해하고 확인하는 것은 단백질의 세포 내 기능을 알아보는데 꼭 필요한 과정입니다.

이분자 형광 상보 기법 (bimolecular fluorescence complementation; BiFC) assay는 형광 신호를 현미경을 통해 바로 측정하기 때문에 단백질의 상호 작용을 연구할 때 간편하게 사용할 수 있습니다. BiFC assay는 노란색 형광을 나타내는 단백질(아래 그림의 'Venus')을 두 절편으로 나누어(아래 그림의 'VN', 'VC'), 멀리 떨어져 있을 때는 형광을 내지 않다가 가까이 하면 상호 결합하여 온전한 형광 단백질 복합체를 형성하여 형광을 내는 현상을 이용한 기법입니다.

Shyu et al, 2008

응용 분야

세포 내에서 단백질-단백질 상호작용의 세포 내 위치 분석

Application1

Figure 1. N-말단이 VN으로 표지된 Sis1(VN-tagged Sis1)과 C-말단이 VC로 표지된 Sis1(VC-tagged Sis1)을 동시에 발현하는 균주에서의 모식도



Application2

Figure 2. Sis1은 Type II HSP40 co-chaperone 으로서 HSP70 단백질인 Ssa1과 상호작용하며 (Luke et al., 1991), homodimer를 형성하는 것으로 알려져 있습니다(Sha et al., 2000).

BiFC(bimolecular fluorescence complementation)신호는 핵과 세포질에서 선명하게 확인되었으며, 이는 VN-tagged Sis1와 VC-tagged Sis1가 핵과 세포질에서 결합함을 의미합니다. Sis1 단백질은 핵과 세포질에 존재하는 것으로 이미 알려진 바 있고 (Huh et al., 2003) BiFC 신호는 VN-tagged Sis1이나 VC-tagged Sis1 중 어느 하나만을 발현하는 균주에서는 나타나지 않았다.

제품 규격/사양

S. cerevisiae VN-Fusion Library
Strains 5,809 strains
Selection Marker KIURA3
Genotype All S. cerevisiae VN-Fusion strains were derived from BY4741
(MATa his3Δ1 leu2Δ0 met15Δ0 ura3Δ0)
Haploid
Culture media YPD: for general culture and maintenance medium
SC-Ura or SC-His: for medium selection & counter selection (auxotrophic culture)
Strain verification Medium selection & Counter selection
Check PCR
Storage Store at -70°C (Glycerol type)
Store at 22°C to 25°C (Agar type)

제조

VN과 KIURA3 marker gene이 포함된 약 2.5kb의 DNA cassette을 pFA6a-VN-KlURA3 벡터에서 F2CORE와 R1CORE primer로 PCR 했습니다. 이 DNA cassette을 약 6,000종의 S. cerevisiae TAP-tagged collection(Ghaemmaghami et al., 2003)에 transformation하여 uracil 선별 배지 (synthetic complete without uracil; SC-Ura)와 histidine 선별 배지 (synthetic complete without histidine; SC-His)에 동시에 배양하여 SC-Ura 고체 배지에서는 자라지만 SC-His 고체 배지에서는 자라지 않는 transformants를 선별하였습니다.

Construction of a VN-tagged strain from the TAP-tagged strain

검증

TAP tag가 VN tag로 제대로 치환되었는지를 검증하기 위해 선별된 transformants를 CHK1 primer(gene-specific primer)와 CHK2 primer(VN-specific primer)를 이용하여 colony PCR 하여 transformant를 확인했습니다.

PCR validation

Manual

S. cerevisiae VN-Fusion Library-Manual


MSDS

S. cerevisiae VN-Fusion Library-MSDS


Brochure

S. cerevisiae VN-Fusion Library - 2011 Brochure


Quality Assurance

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EN ISO 13485 - certificate


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