Enzyme-mediated HotStart™ Technology

Enzyme-mediated HotStart™ Technology (KR 10-292883)

분자 진단으로의 응용에는 최상의 특이도와 민감도가 절대적으로 요구됩니다. 높은 민감도는 응급 환자에게 있어 삶과 죽음을 의미하는 척도가 되며 높은 특이도는 환자에 필요한 치료 방법을 제시하기 때문입니다. 진단 시약의 성능을 높여 의사들의 빠르고 정확한 판단을 돕고 한 발 앞선 건강 관리를 가능하게 할 수 있습니다.   일반적인 PCR 반응 성분 중에서 Mg2+는 DNA polymerase의 Activity에 중요한 역할을 합니다. PCR 반응액에 PPase와 PPi를 넣어주면 PPi는 Mg2+와 결합하여 Mg2+-PPi complex를 형성하여 PCR 반응을 저해하게 되어 PCR 초기 단계에서 발생하는 비 특이 반응을 방지합니다. PCR 반응 시, PCR 반응액이 70℃ 이상이 되면 활성화된 PPase가 PPi를 2Pi로 분해하여 Mg2+을 해리시켜 정상적인 PCR 반응이 진행됩니다. 또한 PPase는 반응 부산물이면서 동시에 PCR 저해제인 PPi를 2Pi로 분해함으로써 PCR 반응성을 증가시키는 효과도 있습니다.

Figure 1. HotStart™ technology의 원리

또한 항체를 사용하지 않기 때문에 별도의 항체 제거 과정을 수행하지 않으므로 PCR 반응 시간을 단축시키는 장점을 가지고 있습니다.

Features

  - 비특이적인 산물 형성의 억제를 통한 특이도 증가
  - 매 cycle마다 발생되는 PCR inhibitor 인 피로인산염(pyrophosphate)을 제거하는 피로인산가수분해효소(pyrophosphatase: PPase)의 작용으로 Plateau 현상을 최소화 함으로써 PCR반응을 연장시켜 탁월한 민감도.

Performance

Figure 2. HBV panel 을 각 copy 별로 Human genomic DNA 3ug에 spike 하여 Enzyme-mediated HotStart와 non-HotStart Taq 중합효소에 의한 결과를 나타냄. 결과는 Enzyme-mediated HotStart를 이용한 경우 비특이적 반응 없이 10 copy까지 검출되는 반면 Non-HotStart Taq 중합효소 반응에서는 비특이적 반응에 의한 PCR 저해로 plateau 현상이 빠르게 진행되어 민감도가 현저히 떨어짐.

Intellectual Property