AccuPower® ETEC-Toxin 4-Plex PCR Kit

AccuPower® ETEC-Toxin 4-Plex PCR Kit          (RUO)
가축의 분변 및 회장에 감염된 병원성대장균 독소형 4종(LT, STa, STb & STX2e)을 동시에 검출하는 정성검사용 유전검사용시약
 
 
Description

 
 병원성대장균은 장관감염에 의해서 발생됩니다. 송아지의 경우는 설사증, 위축 및 폐사가 주요 증상이며, 돼지의 경우는 설사와 탈수, 부종병, 신경증, 패혈증에 의한 폐사발생 등이 주요 증상으로, 자돈 육성상 경제적으로 큰 손실을 주는 질병입니다.
 
 대표적 병원성인자는 장상피세포 부착에 관여하는 섬모유전자와 독소유전자로 구분됩니다.

 병원성대장균의 대표적 독소유전자로는 LT, STa, STb & STX2e 등이 관여하는 것으로 알려져 있습니다.
  

  AccuPower® ETEC-Toxin
4-Plex PCR Kit
동물질병표준검사법
(농림수산검역검사본부)
K 사
LT + (검출) + +
STa + (검출) + - (검출불가)
STb + (검출) + - (검출불가)
STX2e + (검출) + +
비고 검출한계: 1x104 CFU/ml
PreMix 건조키트
Solution Mix STa, STb 검출불가
Solution Mix

* + : 검출, - : 검출불가

 

 
 
Features and Benefits
 
농림수산검역검사본부(QIA)와 (주)바이오니아 연구진과 공동연구로 개발(특허출원).
 
 신속성
병원성 대장균독소인자 4종(LT, STa, STb & STX2e)을 단일 Tube안에서, 한 번의 2-step PCR 반응을 통해 검출하므로, Running time을 2시간 이내로 단축하였습니다.
 
 최적의 민감도 및 특이도
농림수산검역검사본부(QIA) 보유 야외분리균주 171개에 대한 검증을 완료하였습니다. 특허 받은 Enzyme-mediated HotStart 기술 적용으로, 최적 민감도를 1X104 CFU/ml로 맞추어 False Positive를 최대한 배제하였습니다.
 
 뛰어난 재현성
건조형식의 Hotstart PCR Premix type 으로 Template DNA와 D.W만 첨가하므로, 재현성높은 검사결과를 제공합니다.
 
 Amplicon의한 교차오염 방지
DNA 이중나선과 공유결합을 하는 8-MOP(8-methoxypsoralen)이 첨가되어, PCR 반응물을 UV로 조사함으로써 Amplicon에 의한 교차오염 방지가 가능합니다.
 
 보관온도 및 안정성
-20℃에서 2년의 유효기간을 보장합니다
 
 품질인증
모든 Bioneer Accupower® 제품은 ISO 9001 품질시스템하에서 제조됩니다.

Specifications
Target ETEC-Toxin 4 (LT, STa, STb, STX2e)
Instrument MyGenie™ 96 Gradient Thermal Block 또는 타사 Thermal Block
Specimen Feces, small and large intestines, septicemia, urine, other systemic organs
Time to result 2 hours (Post-extraction)
Tests per Kit 96
 
 
 
Experimental data병원성대장균 독소유전자 4종(LT, STa, STb & STX2e)을 동시에 검출합니다.

Figure 1. AccuPower® ETEC-Toxin 4-Plex PCR Kit 성능 실험
AccuPower® ETEC-Toxin 4-Plex PCR Kit를 이용하여, 총 4 ng의 Genomic DNA(균주 EcL6601 / EcL7805 각 2 ng)를 95℃ 5 min, 95℃ 30 sec 65℃ 1 min 30 sec(30 cycles), 72℃ 5 min 조건으로 PCR 반응을 진행하였습니다. 3 μl PCR 반응산물을 2% TBE Agarose 젤에서 전기영동하였습니다.
Lane 1: ETEC-Toxin genomic DNA
Lane M: 100bp DNA Ladder (D-1030)
Lane N: Negative control
  
 
AccuPower® ETEC-Toxin 4-Plex PCR Kit는 동물표준검사법보다 현저히 높은 반응성을 확인하였고, 타사제품은 STa와 STb를 검출할 수 없습니다.

Figure 2. 타사제품 및 QIA의 동물질병표준검사법과의 PCR성능 비교실험

AccuPower® ETEC-Toxin 4-Plex PCR Kit와 QIA의 동물질병표준검사법 그리고 K사 키트를 이용하여, 총 4 ng의 Genomic DNA(균주 EcL6601/EcL7805, 각 2ng)를 각각의 권장조건으로 PCR 반응을 진행하였습니다. [1: 95°C 5 min, 95°C 30 sec 65°C 1 min 30 sec(30 cycle), 72°C 5 min, 2: 95°C 15 min, 94°C 30 sec 63℃ 1 min 30 sec, 72°C 1 min 30 sec(25 cycle), 72°C 10 min, 3: 95°C 12 min, 94°C 30 sec 58°C 1 min 72°C 1 min(35 cycle), 72°C 10 min]. 3μl PCR 반응산물을 2% TBE Agarose gel에서 전기영동하였습니다.
Lane 1: AccuPower® ETEC-Toxin 4-Plex PCR Kit
Lane 2: 동물질병표준검사법(QIA)
Lane 3: 국내 K사 키트
Lane M: 100bp DNA Ladder (D-1030)
Lane N: Negative control
 
 
최적의 민감도 1X104 CFU/ml까지 검출할 수 있습니다.

Figure 3. AccuPower® ETEC-Toxin 4-Plex PCR Kit 민감도 실험

총 4 ng Genomic DNA(균주 EcL6601 / EcL7805 각 2 ng)를 95℃ 5 min, 95℃ 30 sec 65℃ 1 min 30 sec(30 cycles), 72℃ 5 min으로 PCR 반응을 진행하였습니다. PCR 반응산물 3 μl를 2% TBE Agarose 젤에서 전기영동 하였습니다.
Lane 1: 1X108 CFU/ml
Lane 2: 1X107 CFU/ml
Lane 3: 1X106 CFU/ml
Lane 4: 1X105 CFU/ml
Lane 5: 1X104 CFU/ml
Lane 6: 1X103 CFU/ml
Lane 7: 1X102 CFU/ml
Lane M: 100bp DNA Ladder(D-1030)
Lane N: Negative control
 
 
야생시료 24종에 대한 특이도 비교실험에서, QIA의 동물질병표준검사법과 K 사 제품에 비해 AccuPower® ETEC-Toxin 4-Plex PCR Kit가 정확하게 독소유전자 4종을 정확하게 확인하였습니다. 타사제품과 동물표준질병검사법과의 비교검증을 완료하였습니다.

Figure 4. 야외시료에 대한 동물질병표준검사법과의 특이도 실험
AccuPower® ETEC-Toxin 4-Plex PCR Kit와 QIA의 동물질병표준검사법 그리고 K 사키트를 이용하여, 총 4 ng의 Genomic DNA를 각각의 권장조건으로 PCR 반응을 진행하였습니다[ I: 95℃ 5 min, 95℃ 30 sec 65℃ 1 min 30 sec(30 cycle), 72℃ 5 min, II: 95℃ 15 min, 94℃ 30 sec 63℃ 1 min 30 sec 72℃ 1 min 30 sec(25 cycle), 72℃ 5 min, III: 95℃ 12 min, 94℃ 30 sec 58℃ 1 min 72℃ 1 min(35 cycle), 72℃ 10 min]. PCR 반응산물 3 μl를 2% TBE 젤에서 전기영동하였습니다.
Lane 1 ~ 24: Wild-type DNA (야생시료)
N: Negative control
M: 100bp DNA Ladder (D-1030)
 
 
장내유사세균 15종에 대한 특이도 실험에서, 비특이 반응없는 높은 특이도 결과로 위양성 검증을 완료 했습니다.

Figure 5. 장내 유사세균 15종에 대한 AccuPower® ETEC-Toxin 4-Plex PCR Kit 특이도 실험

다양한 장내유사세균 유래의 총 4 ng Genomic DNA 를 AccuPower® ETEC-Toxin 4-Plex PCR Kit를 95℃ 5 min, 95℃ 30 sec 65℃ 1 min 30 sec(30 cycles), 72℃ 5 min 조건으로 PCR 반응을 진행하였습니다. 3 µl PCR 반응산물을 2% TBE 젤에서 전기영동하였습니다.
Lane 1: Acinetobacter lwoffii genomic DNA
Lane 2: Enterococcus fecalis genomic DNA
Lane 3: Maltophilia genomic DNA
Lane 4: Pseudomonas putida genomic DNA
Lane 5: Proteus mirabilis genomic DNA
Lane 6: Citrobacter freundii genomic DNA
Lane 7: Klebsiella pneumonia sub. genomic DNA
Lane 8: Enterobacter cloacae genomic DNA
Lane 9: Acinetobac-ter haemolyticus genomic DNA
Lane 10: Comamonas testosterone genomic DNA
Lane 11: Clostridium perfrigens alpha genomic DNA
Lane 12: Burkholderia cepacia genomic DNA
Lane 13: Ochrobactrum anthropi genomic DNA
Lane 14: Serratia marcescens genomic DNA
Lane 15: Acinetobacter junii genomic DNA
Lane M: 100 bp DNA Ladder (D-1030)
Lane N : Negative control

Cat. No. Product Description Price
MAT-1115 AccuPower® ETEC-Toxin 4-Plex PCR Kit Inquire

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