AccuTool™ Kit

• AccuTool ™ CRISPR-Cas9 Starter Kit

개요

sgRNA, Cas9, Mutation Detection Kit 등을 포함하여 CRISPR-Cas9 실험에 필요한 모든 Materials와 Protocol을 제공합니다.
Plasmid 형태로 CRISPR 실험을 처음 진행한다면 All-In-One kit인 AccuTool™ CRISPR-Cas9 Starter Kit를 추천합니다.

Figure 1. sgRNA expression vector (dRGEN-U6-sgRNA)	Figure 2. Cas9 expression vector (pRGEN-Cas9-CMV/T7)

sgRNA와 Cas9은 plasmid 형태로 제공됩니다.
sgRNA는 총 3종이 제공되며, 본 kit를 이용하기 위해서는 미리 디자인된 sgRNA 서열이 필요합니다.
만일 sgRNA 서열이 준비되지 않았다면 바이오니아의 Custom Design service를 통해 빠르게 준비하세요!

• sgRNA는 sgRNA 발현 vector에 cloning하여 제공됩니다 (Figure 1).
• Plasmid 형태인 pRGEN-Cas9-CMV/T7 vector가 제공됩니다 (Figure 2).
• Positive control인 EGFP, CCR5, HPRT1 중 원하는 하나를 선택, 제공합니다. (Positive control gene organism : Homo sapiens)
• 최적화된 유전자 편집 solution으로 Double Stand Breaks (DSB)를 형성합니다.
• T7E1을 이용한 Mutation Detection Kit가 제공되어 유전자 편집 여부를 쉽게 확인할 수 있습니다.

√ 이런 연구자분들께 추천합니다!

• CRISPR-Cas9 실험을 처음 접하는 분
• CRISPR-Cas9 실험을 하고 싶지만 어떤 제품들을 사야할 지 모르는 분
• Plasmid 형태의 CRISPR 실험을 원하는 분

특장점

• 간편한 실험
  

  하나의 Kit으로 CRISPR-Cas9 실험을 간편하게 수행할 수 있습니다.
  3개의 sgRNA가 포함되어 있어 sgRNA screening에 용이합니다.

• 편리성
  

  Mutation Detection kit가 포함되어 있어 validation을 쉽게 수행할 수 있습니다.

• AccuTool ™ Safe Harbor Knock-In Kit

개요

Safe Harbor라고 하는 유전체의 특정 부위에 원하는 유전자를 삽입하여 유전자가 항상 안정적으로 발현되게 할 수 있습니다.
본 kit는 Safe Harbor 부위를 targeting하는 최적의 gRNA 발현 plasmid와 고효율로 유전자를 Knock-in 시킬 수 있는 HDR donor vector를 포함하고 있어, 이를 이용하여 원하는 insert 유전자를 안정적으로 발현하기 위한 최적의 제품입니다.

Knock-in 연구 시 주의할 사항은 원하는 유전자가 무작위적으로 host genome 내에 integration되어 돌연변이를 일으키거나 유전자의 침묵을 일으킬 수 있는 가능성입니다.
최근에 개발된 새로운 접근 방식은 유전체 내 ‘Safe Harbor’부위에 insert 유전자를 전달하는 것입니다 (Figure 3).
인간의 AAVS1 유전자 부위와 마우스의 Rosa26 유전자 부위에 원하는 특정 유전자를 삽입하면 일관되고 안정적인 발현이 가능합니다.
본 kit는 인간 또는 마우스의 Safe Harbor부위를 targeting하는 최적의 gRNA 발현 vector와 고효율로 유전자를 Knock-in 시킬 수 있는 empty donor vector가 포함된 kit입니다.

Figure 3. CRISPR-Cas9-based Knock-In mechanism
Insert 유전자, selection marker 또는 기타 유전적 요소들이 포함된 donor vector는 homologous recombination을 통해 Safe Harbor site에 integration 됩니다.

특정 유전자를 Knock-in시키기 위해서는 원하는 유전자가 cloning된 donor vector가 필요합니다.
만일 donor template가 준비되지 않았다면 바이오니아의 Gene Synthesis & Cloning Service를 통해 준비할 수 있습니다.

AccuTool™ Safe Harbor Knock-In kit는 크게 AccuTool™ AAVS1 donor kit과 AccuTool™ Rosa26 donor kit 2가지 제품으로 판매됩니다.
본 kit에 포함된 AAVS1_donor vector 혹은 Rosa26_donor vector에 원하는 유전자를 cloning 한 후 sgRNA 및 Cas9 발현 vector와 함께 세포 내에 전달하면 각각의 AAVS1 과 Rosa26 부위에 DSB가 발생합니다. 그리고 세포의 자연적인 DNA 복구 과정인 HDR pathway를 통해 knock-in clone의 DNA 조각이 Safe Harbor site로 integration됩니다.
본 kit에 포함된 primer를 사용하여 PCR을 통해 원하는 유전자가 integration 되었는지 쉽게 확인할 수 있습니다.

특장점

• 안정성
  

  Safe Harbor 유전자 부위를 이용하여 부작용 없이 지속적이고 안정적인 유전자 발현이 가능합니다.

• 정확성
  

  Off-target integration 최소화와 site 특이적 유전자 도입이 가능합니다.

응용 및 적용

• 치료 연구, 유전자 기능 연구, 혈통 추적 및 분석에 유용합니다.