Platform Technologies

AccuPower® Technology (KR 10-162270)

Figure 1
Figure 1. AccuPower® Premix Tube

실험 수행의 편의성
각각의 PCR tube에 primer와 probe, buffer, polymerase, dNTP, 및 stabilizer 등 성공적인 PCR 수행에 필요한 모든 구성 성분이 건조된 형태로 포함 되어 있습니다. 이러한 제품의 특징은 지속적인 안정성과 더불어 sample의 단순한 첨가에 따른 편리성, 자동화 공정에 의한 대량 batch 생산 과정을 통한 재현성을 높여 분자 진단 시장의 easiest-to-use 제품으로 사용자에게 세계적인 수준의 성능을 제공합니다.

Features

뛰어난 재현성
  - 자동화 공정에 의한 대량 batch 생산과 사용자 실수 최소화 (One-step pipetting) 로 재현성 높은 결과

우수한 민감도
  - Enzyme-mediated HotStart 기술의 적용으로 분자 진단에 탁월한 민감도 높은 결과

높은 안정성
  - 진공 건조된 premix type으로 성능 저하 없이 1년의 유효기간 보장

AccuPower® PCR PreMix 는 DNA polymerase, dNTPs 및 Reaction buffer 등 PCR수행에 필요한 구성성분을 혼합하여 1 회 분량씩 진공 건조 시킨 제품으로 실험자는 Template DNA와 DEPC DW 만 첨가함으로써 PCR 반응을 수행할 수 있습니다. 또한 안정화 물질이 첨가되어 있어 상온 (25°C) 보관 할 경우에는 한달 동안 활성이 안정적으로 유지되며, 냉동 보관 할 경우에는 1년 동안 활성이 안정적으로 유지되는 획기적인 제품입니다.

Performance

Stability Test
Figure 2

Figure 2. AccuPower® CMV Quantitative PCR Kit의 실시간 안정성 평가 결과. 실험 결과로부터 얻은 AccuPower® CMV Quantitative PCR Kit의 -20°C (-22~-18°C) 냉동 보관 시 유효 기간은 12개월 이상으로 확인.

Intellectual Property

Title Patent No. Application No. Countries
Method for DNA polymerase reaction mixture production 10-162270   KR
Lyophilizes reagent for polymerase chain reaction 5861251   US
Lyophilizes reagent for polymerase chain reaction 6153412   US

director: 이준희 tel: 577

Enzyme-mediated HotStart™ Technology (KR 10-292883)



  분자 진단으로의 응용에는 최상의 특이도와 민감도가 절대적으로 요구됩니다. 높은 민감도는 응급 환자에게 있어 삶과 죽음을 의미하는 척도가 되며 높은 특이도는 환자에 필요한 치료 방법을 제시하기 때문입니다. 진단 시약의 성능을 높여 의사들의 빠르고 정확한 판단을 돕고 한 발 앞선 건강 관리를 가능하게 할 수 있습니다.

  일반적인 PCR 반응 성분 중에서 Mg2+는 DNA polymerase의 Activity에 중요한 역할을 합니다. PCR 반응액에 PPase와 PPi를 넣어주면 PPi는 Mg2+와 결합하여 Mg2+-PPi complex를 형성하여 PCR 반응을 저해하게 되어 PCR 초기 단계에서 발생하는 비 특이 반응을 방지합니다. PCR 반응 시, PCR 반응액이 70℃ 이상이 되면 활성화된 PPase가 PPi를 2Pi로 분해하여 Mg2+을 해리시켜 정상적인 PCR 반응이 진행됩니다. 또한 PPase는 반응 부산물이면서 동시에 PCR 저해제인 PPi를 2Pi로 분해함으로써 PCR 반응성을 증가시키는 효과도 있습니다.

Figure 1
Figure 1. HotStart™ technology의 원리
또한 항체를 사용하지 않기 때문에 별도의 항체 제거 과정을 수행하지 않으므로 PCR 반응 시간을 단축시키는 장점을 가지고 있습니다.

Features

  - 비특이적인 산물 형성의 억제를 통한 특이도 증가
  - 매 cycle마다 발생되는 PCR inhibitor 인 피로인산염(pyrophosphate)을 제거하는 피로인산가수분해효소(pyrophosphatase: PPase)의 작용으로 Plateau 현상을 최소화 함으로써 PCR반응을 연장시켜 탁월한 민감도.

Performance

Figure 2

Figure 2. HBV panel 을 각 copy 별로 Human genomic DNA 3ug에 spike 하여 Enzyme-mediated HotStart와 non-HotStart Taq 중합효소에 의한 결과를 나타냄. 결과는 Enzyme-mediated HotStart를 이용한 경우 비특이적 반응 없이 10 copy까지 검출되는 반면 Non-HotStart Taq 중합효소 반응에서는 비특이적 반응에 의한 PCR 저해로 plateau 현상이 빠르게 진행되어 민감도가 현저히 떨어짐.

Intellectual Property

Title Patent No. Application No. Countries
Hot start PCR Mixture Comprising Pyrophosphate and Pyrophosphatase 10-292883   KR
Dried Composition for hot-start PCR with Long-Term Stability   10-2007-109055 KR
Dried Composition for hot-start PCR with Long-Term Stability   20100209973 US

director: 이준희 tel: 577




Dual-HotStart™ Technology (KR 10-292883)

Figure 1

Figure 1. Dual-HotStart™ technology의 원리

Dual-HotStart™ technology 는 임상 검체로부터 우수한 민감도와 특이도로 타겟 RNA를 검출할 수 있는 기술입니다. 해당 기술은 바이오니아의 독창적인 enzyme-mediated HotStart 기술을 역전사 과정과 PCR 증폭 과정 모두에 적용한 것으로 비특이 cDNA의 합성과 증폭을 이중으로 제거하여 민감도 높은 one-step RT-qPCR 실험을 실현합니다.

Performance

Dual-HotStart™ RT-PCR technology는 비특이 cDNA의 합성과 증폭을 이중으로 제거하여 민감도와 특이도 높은 결과를 얻을 수 있습니다.

Figure 2

Figure 2. 극 미량의 Target Template가 고농도의 RNA에 포함되어 있는 시료에 대해서도 검출

계열 희석한 HCV RNA를 Human total RNA 2ug에 spike하여 conventional RT-PCR 방법으로 증폭한 결과 (좌)와 Dual-HotStart™ RT-PCR 방법으로 증폭한 결과 (우). 결과를 통해 Dual-HotStart™ RT-PCR 방법으로 비특이 산물의 생성 없이 더욱 낮은 농도의 RNA 타겟 검출이 가능함을 확인.

Intellectual Property

Title Patent No. Application No. Countries
Compositions for hot start reverse transcription reaction or hot start reverse transcription polymerase chain reaction   KR 10-2013-0025119 KR
Compositions for hot start reverse transcription reaction or hot start reverse transcription polymerase chain reaction   PCT/KR2013/001935 PCT

director: 이준희 tel: 577

RocketScript™ Reverse Transcriptase (KR 10-984483)

Figure 1
Figure 1. RocketScript™ reverse transcriptase 의 구조

Protein engineering
저희는 역전사의 성능에 영향을 미치지 않고 열 안정성이 높은 RTase를 만들기 위해 천연 M-MLV의 구조와 열역학 및 응용된 다수의 point 돌연변이를 분석하였습니다. 분석 결과를 토대로 각각의 유전자의 합성 및 다양한 이형들의 발현을 통해 각각의 열 안정성과 성능을 측정하였습니다. 측정된 결과를 통해 우수한 성능을 나타내는 것을 선별하여 RocketScript™라 명명하였습니다.

문제점

RNA의 복잡한 2차 구조가 효율적 cDNA 합성 저해

해결책

고온에서 stem과 loop를 melting하여 역전사 효소의 역할 수행을 도움

Features

RNA target에 대한 민감도를 높임
Full-length cDNA 산물의 특이도를 높임

RocketScript™는 Bioneer가 합성 생물학 기술을 이용하여 독자적으로 개발한 M-MLV유래의 Thermostable Reverse Transcriptase 입니다. 저온(42℃)에서 최적 활성을 갖는M-MLV RTase는 복잡한 2차구조 (Secondary Structure)의 RNA를 효과적으로 cDNA 로 합성하는 데 많은 문제점이 있었습니다. 이런 문제점을 보완한 RocketScript™는 thermostable activity (42~70℃)를 갖고 있어 complex 구조의 RNA도 효과적으로 full-length cDNA로 합성 할 수 있습니다.

Performance

Dual-HotStart™ RT-PCR technology는 비특이 cDNA의 합성과 증폭을 이중으로 제거하여 민감도와 특이도 높은 결과를 얻을 수 있습니다.

Figure 2

Figure 2. 기존 역전사효소 (B)에 비교하여 RocketScript™ (A)는 모든 실험 온도에서 높은 안정성을 보여주고 있다. (target gene: Human Myc (495 bp)) Lane 1-4는 각각 100, 10, 1, 0.1 ng의 인간 HeLa 세포의 total RNA의 전기영동 결과.

Intellectual Property

Title Patent No. Application No. Countries
Cyclic reverse transcription method 10-984483   KR
Cyclic reverse transcription method   20100221786 US
Reverse transcriptase having improved thermostability   10-2011-0011639 KR

director: 이준희 tel: 577




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