AccuPower® GreenStar™ qPCR PreMix

AccuPower® GreenStar™ qPCR PreMix는 dsDNA binding dye 방식의 real-time PCR을 통하여 다양한 종류의 시료에서 원하는 target 유전자를 정확하고 빠르게 검출할 수 있는 제품입니다. 바이오니아의 enzyme-mediated HotStart 특허기술이 적용되어 반응특이성과 PCR 증폭효율이 향상되었으며, real-time PCR에 필요한 모든 시약을 반응 tube에 진공건조시켜 master mix 제품의 반복사용으로 인한 cross-contamination 문제를 방지하여 정확한 실험 결과를 얻을 수 있습니다. 

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카탈로그 번호

개요

PyroHotStart 기술을 적용하여 비특이 증폭산물 생성을 최소화하고, PCR 반응 효율을 극대화 함으로써 미량의 template DNA를 효과적으로 증폭할 수 있습니다. PyroHotStart 기술은 pyrophosphate와 pyrophosphatase 효소를 이용하여, PCR 반응을 시작하기 전 (zero cycle)에 발생하는 비특이적 반응을 줄여 특이도를 높인 바이오니아 고유의 특허기술입니다. 뿐만 아니라 매 증폭 cycle시 발생하여 PCR 저해물질로 작용하는 PPi를 제거함으로써 반응 효율을 높입니다.

(a) Zero cycle에서 PCR 반응 억제
PCR mixture 제조 후, pre-denaturation 온도에 도달하기 전에 비특이적 반응물이 생성되는 것을 방지하기 위해 PPi를 이용합니다. DNA polymerase가 활성을 갖기 위해서는 Mg2+ 이온이 필요한데, mixture에 첨가되어 있는 PPi는 Mg2+ 이온과 높은 친화력을 갖기 때문에 Mg2+ 이온을 붙잡아 둠으로써 PCR 반응을 억제합니다.


(b) 변성 (Denaturation)
Mixture에 첨가되어 있는 PPase는 denaturation 단계에서 반응 온도가 올라가면 활성화되어 PPi를 Pi로 분해하여 Mg2+ 이온을 해리 시킵니다. 해리된 Mg2+ 이온은 DNA polymerase에 결합하여 PCR 반응을 진행할 수 있도록 enzyme을 활성화 합니다.


(c) 풀림 (Annealing) & 증폭 (Extension)
활성화된 DNA polymerase는 PCR cycle이 진행됨에 따라 target DNA를 증폭합니다.

특장점

  • 장비 호환성

    호환성이 뛰어나 여러 종류의 Real-time PCR 장비에 대해 최적화된 결과를 얻을 수 있습니다.

  • 편리성

    각 tube에 DNA polymerase와 Real-Time PCR 수행에 필요한 모든 구성 성분이 포함되어 있어, template DNA, target 유전자에 대한 probe & primer, D.W.만 넣어 반응을 수행할 수 있습니다.

  • 안정성

    PCR 반응 혼합액에 안정화제가 포함되어 있어 상온배송이 가능하고 solution type 제품보다 안정성 뛰어납니다.

  • 재현성

    ISO 9001 품질 시스템 하에서 대량 생산되어 lot 간 편차가 최소화 되었으며, 반복적인 실험에도 재현성 있는 실험 결과를 제공합니다.

응용 및 적용

• Real-Time Quantification of DNA/cDNA targets.

• Quantification of gene expression

• Microbial/Viral Pathogen Detection.

실험 자료


Specificity activity

figure1

Figure. Real-Time PCR Data of AccuPower® Greenstar™ qPCR PreMix

AccuPower® Greenstar™ qPCR PreMix provides at least 7 orders of magnitude in dynamic range (10 fg ~ 10 ng/reaction). All data were obtained using Exicycler™ 96 Real-time Quantitative Thermal Block.

(A) : Amplification curve. Lambda DNA primers were added into AccuPower® Greenstar™ qPCR PreMix. A series of Lambda DNA positive control diluents were tested.
(B) : Standard curve. Data were obtained using Exicycler™ 96 Real-Time Quantitative Thermal Block (Bioneer Co.).
(C) : Melting curve analysis of AccuPower® Greenstar™ qPCR PreMix. - The melting curve shows that only single amplified PCR product was obtained in all template range.

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