AccuPower® ETEC-Pili 5-Plex PCR Kit

AccuPower® ETEC-Pili 5-Plex PCR Kit (RUO)는 가축의 분변 및 회장에 감염된 병원성대장균 섬모유전자 5종(F4, F5, F6, F18 & F41)을 동시에 검출하는 정성검사용 유전검사시약입니다.
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카탈로그 번호
MAP-1115

AccuPower® ETEC-Pili 5-Plex PCR Kit         (RUO)

가축의 분변 및 회장에 감염된 병원성대장균 섬모유전자 5종(F4, F5, F6, F18 & F41)을 동시에 검출하는 정성검사용 유전검사용시약
 
 
Description

 
 병원성대장균은 장관감염에 의해서 발생됩니다. 송아지의 경우는 설사증, 위축 및 폐사가 주요 증상이며, 돼지의 경우는 설사와 탈수, 부종병, 신경증, 패혈증에 의한 폐사발생 등이 주요 증상으로, 자돈 육성상 경제적으로 큰 손실을 주는 질병입니다.
 
 대표적 병원성인자는 장상피세포 부착에 관여하는 섬모유전자와 독소유전자로 구분됩니다.
 
 병원성대장균의 대표적 섬모유전자로는 F4(K88), F5(K99), F6(987P), F18 그리고 F41 등이 관여하는 것으로 알려져 있습니다.

  AccuPower® ETEC-Pili
5-Plex PCR Kit
동물질병표준검사법
(농림수산검역검사본부, QIA)
F4(K88) + (검출) +
F5(K99) + (검출) +
F6(987P) + (검출) +
F18 + (검출) +
F41 + (검출) +
비고 검출한계: 1 x 104 CFU/ml,
PreMix 건조키트
Solution Mix
* + : 검출, - : 검출불가
 
 
 
Features and Benefits
 
농림수산검역검사본부(QIA)와 (주)바이오니아 연구진이 공동연구 개발(특허출원).
  
 신속성
병원성대장균 섬모유전자 5종 [F4(K88), F5(K99), F6(987P), F18 & F41]을 단일 Tube안에서, 한 번의 2-step PCR 반응을 통해 검출하므로, Running time을 2시간 이내로 단축하였습니다.
 
 최적의 민감도 및 특이도
농림수산검역검사본부(QIA) 보유 야외분리균주 171개에 대한 검증을 완료하였습니다. 특허 받은 Enzyme-mediated HotStart 기술 적용으로, 최적 민감도 1X104 CFU/ml로 맞추어 False Positive를 최대한 배제하였습니다.
 
 뛰어난 재현성
건조형식의 Hotstart PCR Premix type으로 Template DNA와 D.W만 첨가하므로, 재현성높은 검사결과를 제공합니다.
 
 Amplicon 오염 방지
DNA 이중나선과 공유결합을 하는 8-MOP(8-methoxypsoralen)이 첨가되어, PCR 반응물을 UV로 조사함으로써 Amplicon에 의한 교차오염 방지가 가능합니다.
 
 보관온도 및 안정성
-20℃에서 2년의 유효기간을 보장합니다.
 
 품질인증
모든 Bioneer Accupower® 제품은 ISO 9001 품질시스템하에서 제조됩니다.
Specifications
 
Target ETEC-Pili 5 (F4, F5, F6, F18, F41)
Instrument MyGenie™ 96 Gradient Thermal Block 또는 타사 Thermal Block
Specimen Feces, small and large intestines, septicemia, urine, other systemic organs
Time to result 2 hours (Post-extraction)
Tests per Kit 96
 
 
 
Experimental data병원성대장균 섬모유전자 5종 (F4, F5, F6, F18 & F41)을 동시에 검출합니다.

Figure 1. AccuPower® ETEC-Pili 5-Plex PCR Kit 성능 실험

AccuPower®ETEC-Pili 5-Plex PCR Kit를 이용하여, 총 5 ng의 Genomic DNA 균주(EcL1033 / EcL7805 / EcL2316 / EcL13316 )를 95℃  5 min, 95℃ 30 sec. 65℃ 1 min 30 sec(30 cycles), 72℃ 5 min의 조건으로 PCR 반응을 진행하였습니다.  3 µl PCR 반응산물을 2% TBE Agarose 젤에서 전기영동하였습니다.
Lane 1: ETEC-Pili genomic DNA
Lane N: Negative control
Lane M: 100 bp DNA Ladder (D-1030)
 
 
QIA의 동물표준질병검사법과 비교검증을 완료하였고, 높은 반응성으로 5종을 검출합니다.

Figure 2. AccuPower® ETEC-Pili 5-Plex PCR Kit 성능 비교 실험
AccuPower® ETEC-Pili 5-Plex PCR Kit와 QIA의 동물질병표준검사법에 필요한 5종의 프라이머 셋을 첨가하여, 총 5 ng의 Genomic DNA(균주 EcL1033 / EcL7805 / EcL2316 / EcL13316)를 각각의 권장 조건으로 PCR 반응을 진행하였습니다[1: 95℃ 5 min, 95℃ 30 sec 65℃ 1 min 30 sec(30 cycles), 72℃ 5 min, 2: 95℃ 15 min, 94℃ 30 sec 63℃ 1min 30 sec 72℃ 1 min 30 sec(25 cycles), 72℃ 10 min]을 진행하였습니다. 3 µl PCR 반응산물을 2% TBE Agarose 젤에서 전기영동하였습니다.
Lane 1: AccuPower® ETEC-Pili 5-Plex PCR Kit
Lane 2: QIA의 동물질병표준검사법
Lane M: 100 bp DNA Ladder (D-1030)
Lane N: Negative control
 
 
최적의 민감도 1X104 CFU/ml까지 검출합니다.
Figure 3. AccuPower® ETEC-Pili 5-Plex PCR Kit에 대한 민감도실험
총 5 ng의 Genomic DNA (균주 EcL1033 / EcL7805 / EcL2316 / EcL13316 )를 95℃ 5 min, 95℃ 30 sec 65℃ 1 min 30 sec(30 cycles), 72℃ 5 min으로 PCR 반응을 진행하였습니다. PCR 반응산물 3 µl를 2% TBE Agarose 젤에서 전기영동하였습니다
Lane 1: 1x108 CFU/ml
Lane 2: 1x107 CFU/ml
Lane 3: 1x106 CFU/ml
Lane 4: 1x105 CFU/ml
Lane 5: 1x104 CFU/ml
Lane 6: 1x103 CFU/ml
Lane 7: 1x102 CFU/ml
Lane M: 100 bp DNA Ladder (D-1030)
Lane N: Negative control
 
 
야생시료 24종에 대한 특이도 비교실험에서, QIA의 동물질병표준검사법에 비해 AccuPower® ETEC-Pili 5-Plex PCR Kit가 F18형만을 정확하게 확인하였습니다.

Figure 4. AccuPower® 야외시료에 대한 QIA의 동물질병표준검사법과의 특이도 비교실험

AccuPower® ETEC-Pili 5-Plex PCR Kit와 QIA의 동물질병표준검사법에 필요한 5종의 프라이머set을 첨가하여, 야생시료 24종에서 추출한 각각의 5 ng Genomic DNA로 각 권장조건으로 PCR 반응을 진행하였습니다[ I: 95℃ 5 min, 95℃ 30 sec 65℃ 1 min 30 sec(30 cycles), 72℃ 5 min, II: 95℃ 15 min, 94℃ 30 sec 63℃ 1 min 30 sec 72℃ 1 min 30 sec(25 cycles), 72℃ 5 min]. 3 µl PCR 반응산물을 2% TBE 젤에서 전기영동하였습니다.
Lanes 1~24 : Wild -type DNA (야생시료, 농림수산검역검사본부)
Lane N: Negative control
Lane M: 100 bp DNA Ladder (D-1030)
 
 
장내유사세균 15종에 대한 특이도 실험에서, 비특이 반응없는 높은 특이도 결과로 위양성 검증을 완료 했습니다.
Figure 5. 장내 유사세균 15종에 대한 AccuPower® ETEC-Pili 5-Plex PCR Kit 특이도 실험
다양한 장내유사세균 유래의 Genomic DNA 5ng을 Accupower® ETEC-Pili 5-Plex PCR Kit를 이용하여, 95℃ 5 min, 95℃ 30 sec 65℃ 1 min 30 sec(30 cycle), 72℃ 5 min의 조건으로 PCR 반응을 진행하였습니다. 3 μl PCR 반응산물을 2% TBE Agarose 젤에서 전기영동 하였습니다.
Lane 1: Acinetobacter lwoffii genomic DNA
Lane 2: Enterococcus fecalis genomic DNA
Lane 3: Maltophilia genomic DNA
Lane 4: Pseudomonas putida genomic DNA
Lane 5: Proteus mirabilis genomic DNA
Lane 6: Citrobacter freundii genomic DNA
Lane 7: Klebsiella pneumonia sub. genomic DNA
Lane 8: Enterobacter cloacae genomic DNA
Lane 9: Acinetobacter haemolyticus genomic DNA
Lane 10: Comamonas testosterone genomic DNA
Lane 11: Clostridium perfrigens alpha genomic DNA
Lane 12: Burkholderia cepacia genomic DNA
Lane 13: Ochrobactrum anthropi genomic DNA
Lane 14: Serratia marcescens genomic DNA
Lane 15: Acinetobacter junii genomic DNA
Lane M: 100bp DNA Ladder (D-1030)
Lane N : Negative control

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