AccuPower® Ligation PreMix (96 T, 20 μl)

• Stability

Figure 1. 실온 보관 후의 AccuPower^® Ligation PreMix의 안정성 실험

- Lane 1 ~ 12: Lambda DNA / Hind III fragment (1 ㎍)
- Lane 13 ~ 24: Lambda DNA / EcoR V fragment (1 ㎍)
- Lane 2, 3, 14, 15: 실온에서 1개월 보관 후 Ligation test
- Lane 5, 6, 17, 18: 실온에서 2 개월 보관 후 Ligation test
- Lane 8, 9, 20, 21: 실온에서 3 개월 보관 후 Ligation test
- Lane 11, 12, 23, 24: 실온에서 4 개월 보관 후 Ligation test

• Ligation Activity

Figure 2. 반응 시간에 따른 AccuPower^® Ligation PreMix의 효율성 실험

- Lane 1 ~ 8: Lambda DNA / Hind III fragment (1 ㎍)
- Lane 9 ~ 16: Lambda DNA / EcoR V fragment (1 ㎍)
- Lane 2, 10: 60분 동안 ligation
- Lane 6, 14: 20분 동안 ligation
- Lane 3, 11: 50분 동안 ligation
- Lane 7, 15: 10분 동안 ligation
- Lane 4, 12: 40분 동안 ligation
- Lane 8, 16: 5분 동안 ligation
- Lane 5, 13: 30분 동안 ligation

• 타사 ligation 제품과의 Ligation 효율비교

Figure 3. 타사 ligation 제품과의 Ligation 효율비교

- Lane 1, 9: Intact Lambda DNA (1 ㎍)
- Lane 2 ~ 8: Lambda DNA / Hind III fragment (1 ㎍)
- Lane 10 ~ 16: Lambda DNA / EcoR V fragment (1 ㎍)

• Lane Company Product name
- 3, 4, 11, 12: Bioneer  AccuPower Ligation PreMix
- 5, 13: Company N T4 DNA ligase
- 6, 14: Company N Quick Ligation Kit
- 7, 15: Company P LigaFast Rapid DNA ligation system
- 8, 16: Company A Ready-To-Go T4 DNA ligase

1증류수 또는 TE 버퍼에 녹아있는 DNA를 ligation 반응에 사용할 수 있습니다.

2실험자 개인이 사용하는 standard ligation protocol의 특정한 몰 비율에 따라 ligation 반응에 사용할 DNA를 준비합니다. (권장 몰 비율- Vector : Insert DNA = 1 : 3)

3AccuPower Ligation PreMix 의 한 튜브에 20 ㎕의 DNA 용액(insert, vector포함)을 첨가합니다. 만약 DNA 용액의 볼륨이 20 ㎕ 보다 적다면, 최종 볼륨이 20 ㎕이 되도록 증류수를 첨가합니다.

4Pipetting과 vortexing을 이용하여 동결 건조된 PreMix의 구성 성분을 완전히 재수화 시켜 섞어 주고, 간단한 원심분리를 통하여 내용물을 튜브 바닥으로 모읍니다. 원심분리는 생성된 거품을 제거하는 역할도 합니다.

5100㎕의 competent cell로 형질전환을 위해 ligation 반응액의 10 ㎕를 사용합니다. 만약, electroporation을 통하여 competent cell로 형질전환을 수행하려면, electroporation 전에 DNA를 정제하신 후 사용하시기 바랍니다.