PreMix는 PCR 수행에 필요한 materials이 1회 분량씩 PCR tube에 진공 건조되어 있어 사용이 편리하며, 실험 시 반복적인 pipetting으로 인한 contamination 및 error를 줄여 재현성이 높습니다. 또한, 안정화 물질이 포함되어 있어 solution type 제품보다 안정성이 뛰어납니다. Master Mix는 액상타입으로 reaction volume 조정이 용이하며 장비 호환성이 높습니다.
AccuPower® RocketScript™ Cycle RT PreMix & Master Mix
AccuPower® RocketScript™ Cycle RT PreMix는 바이오니아가 개발한 Thermostable RTase (RocketScript™ Reverse Transcriptase)와 순환 온도 역전사 반응 (CTRT, Cyclic Temperature Reverse Transcription) 기술이 융합된 차세대 cDNA synthesis 용 제품입니다. 따라서 낮은 농도의 RNA에서도 cDNA를 합성할 수 있으며, cDNA 합성에 필요한 모든 구성물질이 포함되어 있어 간편하게 사용하실 수 있습니다. 또한 반응에 적합한 농도의 Oligo dT20, dN6, dN12 primer가 포함된 제품을 선택할 수 있어서 사용자는 template RNA 만 넣어 손쉽게 cDNA 합성을 할 수 있습니다.
특장점
- 민감도 & 효율성
순환 온도 역전사 반응과 Thermostable RTase (RocketScript ™ RTase)의 융합 기술은 민감도와 효율을 증가시키고 PCR 반응과 같이 순환온도반응을 적용하여 cycle 수를 조절하여 단시간에 낮은 농도의 RNA로부터 손쉽게 cDNA를 합성할 수 있습니다.
- 열 안정성
70℃에서도 활성을 갖는 뛰어난 열안정성의 RocketScript ™ RTase 적용으로 2차 구조 RNA의 cDNA 합성에 적합합니다. cDNA 합성 온도는 42 ~ 70℃까지 고객의 실험 조건에 맞게 다양한 온도로 설정할 수 있어 효과적으로 cDNA를 합성할 수 있습니다.
- 반응성
순환 온도 역전사 반응과 더불어 22 ~ 55°C내의 단일 온도에서 역전사 반응이 가능합니다.
- 편리성
Thermostable Reverse Transcriptase, RNase inhibitor, primer 등 cDNA 합성에 필요한 모든 구성물질이 포함되어 있어, 증폭하고자 하는 RNA와 D.W.만을 첨가하여 바로 RT 반응을 수행할 수 있습니다.
응용 및 적용
• First-strand synthesis of cDNA from RNA molecules (RT)
• Random priming reaction
• cDNA library construction
• Probe labeling
• mRNA 5‘-end mapping by primer extension analysis
• PCR
• Real-time qPCR
실험 자료
Figure. Comparison of amplification efficiency between AccuPower®RocketScript ™ Cycle RT PreMix and competitors' RTases
(a) Sensitivity test
Primer set; Human TFRC set
Lane M; 1 kb DNA Ladder
Lane1; 100 ng Human total RNA from HeLa cell
Lane2; 10 ng Human total RNA from HeLa cell
Lane3; 1 ng Human total RNA from HeLa cell
Lane4; 100 pg Human total RNA from HeLa cell
RT reaction condition is performed according to each manufacturer’s recommendations
(b) Full-Length cDNA synthesis test
RT reactions were performed according to each manufacturer’s recommendation. All cDNAs were amplified with AccuPower® Hotstart PCR Premix (Cat. No. K-5050, Bioneer)
Note: Competitor products show inhibition at high input concentrations of total RNA
Lane 1; 1 μg Human total RNA from HeLa cell
Lane 2; 100 ng Human total RNA from HeLa cell
Lane 3; 10 ng Human total RNA from HeLa cell