AccuPower® RocketScript™ RT PreMix & Master Mix, RNase H Minus

AccuPower® RocketScript™ RT PreMix, RNase H Minus는 바이오니아에서 독자적으로 개발한 RocketScript™ RTase, RNase H Minus를 사용한 제품입니다. 독자적 유전공학 기술을 이용하여 RNase H 활성을 제거하여 long target RNA의 cDNA 합성에 유용하며 신장성 및 민감도가 뛰어나 1 pg의 human total RNA에서도 성공적으로 cDNA를 합성할 수 있습니다. 또한 cDNA 합성에 필요한 모든 구성물질이 포함되어 있어, 증폭하고자 하는 RNA와 D.W.만을 첨가하여 바로 RT 반응을 수행할 수 있습니다.

As low as ₩239,000

카탈로그 번호

제품 개요

제품 소개 영상

특장점

단시간 합성 : 10분의 RT반응으로도 9 kb 합성 가능
70℃에서도 활성을 갖는 뛰어난 열 안정성의 RocketScript™ RTase 적용으로 2차 구조 RNA를 단시간내 cDNA 합성을 할 수 있어 시간적, 경제적으로 효율적입니다.
Eliminated RNase H activity
독자적 유전공학 기술을 이용하여 개발된 효소를 이용하여 long target RNA의 cDNA 합성에 유용하며 최대 12.5 kb까지 합성할 수 있습니다.
민감도
민감도가 뛰어나 1 pg 의 human total RNA에서도 효과적으로 cDNA를 합성할 수 있습니다.
편리성
cDNA 합성하기 어려운 Long size RNA(9 kb) 를 10분만에 누구나 손쉽게 cDNA 로 합성할 수 있습니다.
재현성
ISO 9001 품질 시스템 하에서 대량 생산되어 lot 간 편차가 최소화 되었으며, 반복적인 실험에도 재현성 있는 실험 결과를 제공합니다.

응용 및 적용

• First-strand synthesis of cDNA from RNA molecules (RT)

• Random priming reaction

• cDNA library construction

• Probe labeling

• mRNA 5‘-end mapping by primer extension analysis

• PCR

• Real-time qPCR

실험 자료

Figure. Performance of the AccuPower^® RocketScript ™ RT PreMix, RNase H Minus in two-step RT-PCR.
Target mRNAs ranged from 500 bp to 11 kb were reverse transcribed by using AccuPower^® RocketScript ™ RT PreMix, RNase H Minus. With each cDNA, PCR was performed by using AccuPower^® ProFi Taq PCR PreMix (Cat. No. K-2631, Bioneer). Template sizes are indicated above the gel image.

M1; 1 kb DNA Ladder (Cat. No. D-1040, Bioneer)
M2; Lambda DNA/Hind III Markers (Cat. No. D-1050, Bioneer)

director: kim,hyunseo tel: 578

제품 규격/사양

▶ 제품 규격/사양

DNase activity	No
RNase activity	No
RNase H activity	No
Fragment size	Up to 12.5 kb

▶ 실험 자료

Figure 1. Comparison of cDNA synthesis efficiency of AccuPower^® RocketScript ™ RT PreMix, RNase H Minus and other suppliers’ products.
Synthesis of cDNA was conducted at 50℃ or 42℃ for 10, 20, 30 and 60 min with 1 µg of 3.4 kb to 9 kb RNA transcript (total RNA from HeLa cells) as a template by using AccuPower^® RocketScript ™ RT PreMix, RNase H Minus and other kits from competitors. With each cDNA, PCR was performed by using AccuPower^® ProFi Taq PCR PreMix
(Cat. No. K-2631, Bioneer). PCR products were analyzed on a 1% alkaline agarose gel.

Lane 1; RT 10 min Lane 2: RT 20 min
Lane 3; RT 30 min Lane 4: RT 60 min
M; 1 kb DNA Ladder (Cat. No. D-1040, Bioneer)

Figure 2. Thermal stability of AccuPower^® RocketScript ™ RT PreMix, RNase H Minus.
Reverse transcription using AccuPower^® RocketScript ™ RT PreMix, RNase H Minus was performed at 50℃ to 70℃ for 30 min with 100 ng, 10 ng, 1 ng and 100 pg of 600 bp RNA transcript as a template. Even at 70℃, AccuPower^® RocketScript ™ RT PreMix, RNase H Minus successfully completed cDNA synthesis. With each cDNA, PCR was performed by using AccuPower^® PyroHotStart Taq PCR PreMix (Cat. No K-2611, Bioneer).

Lane 1; 100 ng of total RNA from HeLa cells
Lane 2; 10 ng of total RNA from HeLa cells
Lane 3; 1 ng of total RNA from HeLa cells
Lane 4; 100 pg of total RNA from HeLa cells
M; 100 bp DNA Ladder (Cat. No. D-1030, Bioneer)

Figure 3. Sensitivity comparison of RTase products with various targets.
Various target mRNAs were reverse transcribed at 50℃ for 30 min by using AccuPower^® RocketScript™ RT PreMix, RNase H Minus and competitor’s product, respectively. With each cDNA, PCR was performed by using AccuPower^® PyroHotStart Taq PCR PreMix (Cat. No K-2611, Bioneer).

Lane 1; 10 ng of total RNA from HeLa cells
Lane 2; 1 ng of total RNA from HeLa cells
Lane 3; 100 pg of total RNA from HeLa cells
Lane 4; 10 pg of total RNA from HeLa cells
M; 100 bp DNA Ladder (Cat. No. D-1030, Bioneer)

Figure 4. Broad dynamic range of AccuPower^® RocketScript ™ RT PreMix, RNase H Minus.
First-strand cDNA was synthesized using the AccuPower^® RocketScript ™ RT PreMix, RNase H Minus. cDNA was amplified using the AccuPower^® Plus DualStar™ qPCR PreMix (Cat. No. K-6600, Bioneer) on the Exicycler™ 96 Real-Time Quantitative Thermal Block from Bioneer. The standard curve illustrates high linearity (R2 = 0.999) across a broad range of input RNA, suggesting that the relative representation of specific RNA transcripts is preserved in the cDNA pool regardless of the abundance of total RNA. Amplification was performed on 10-fold serial dilutions of HeLa total RNA (1 μg to 1 pg) and mouse total RNA (10 μg to 1 pg).

◈ Quality Assurance

Bioneer is the holder of Quality Management System Certificates for the following standards.

• ISO 9001 - certificate

주문 정보

카탈로그 번호	제품명	규격				가격
K-2221	AccuPower^® RocketScript™ RT PreMix & Master Mix, RNase H Minus	PreMix type	0.2 ml thin-wall 8-tube strips with attached cap / 96 tubes		20 µl/rxn	₩K-2221
K-2223					50 µl/rxn	₩K-2223
K-2245				dN6	20 µl/rxn	₩K-2245
K-2246				dN6	50 µl/rxn	₩K-2246
K-2247				dN12	20 µl/rxn	₩K-2247
K-2248				dN12	50 µl/rxn	₩K-2248
K-2241				dT20	20 µl/rxn	₩K-2241
K-2243				dT20	50 µl/rxn	₩K-2243
K-2222			0.2 ml thin-wall 8-tube strips with attached cap / 480 tubes		20 µl/rxn	₩K-2222
K-2224					50 µl/rxn	₩K-2224
K-2242				dT20	20 µl/rxn	₩K-2242
K-2244				dT20	50 µl/rxn	₩K-2244
K-2249*		MasterMix type	1 ml of 2X Master mix solution			₩K-2249

*MasterMix 제품의 경우, Primer(dT20&dN6)는 별도의 튜브에 제공됩니다.

자주 묻는 질문들

PreMix와 Master Mix 제품의 차이점은 무엇인가요?

PreMix는 PCR 수행에 필요한 materials이 1회 분량씩 PCR tube에 진공 건조되어 있어 사용이 편리하며, 실험 시 반복적인 pipetting으로 인한 contamination 및 error를 줄여 재현성이 높습니다. 또한, 안정화 물질이 포함되어 있어 solution type 제품보다 안정성이 뛰어납니다. Master Mix는 액상타입으로 reaction volume 조정이 용이하며 장비 호환성이 높습니다.

PreMix의 사용법/ PreMix 시약 볼륨은 어떻게 맞추면 되나요?

건조된 시약의 부피는 고려하지 않아도 되며, template, primer, nuclease-free water만으로 최종 reaction volume을 맞춰주면 됩니다.

Tracking dye 포함제품과 미포함제품 모두 주문 가능한가요?

동일한 제품이라도 Cat. No에 따라 tracking dye 포함 제품과 미포함 제품으로 나누어집니다. -dye제품에 대한 Cat. No가 없다면, custom제작이 가능하나 수령하기까지 1~2주 정도의 시간이 소요될 수 있습니다. RT제품군은 일부 제품을 제외하고 dye가 포함되어 있지 않습니다. Tracking dye 포함 제품은 전기 영동 시 별도의 loading dye를 섞어주지 않아도 된다는 이점이 있습니다. (* RT제품 중 dye가 포함된 경우 cDNA 합성 후에 PCR 진행 시 10% v/v로 사용할 경우 문제가 되지 않으나 그 이상 사용할 경우 PCR에 영향을 줄 수 있습니다).

Master Mix의 사용법

2X Master Mix로 제공되며 최종 reaction volume의 1/2만큼 사용하면 됩니다. 반응수(tests)는 reaction volume을 얼마로 사용하는지에 따라서 달라집니다.

PreMix제품의 반응수(tests)와 제공량(volume)

PreMix는 96 tests와 480 tests 제품이 있으며, 제품에 따라 20 μl, 50 μl reaction volume으로 판매되고 있습니다.

RT primer로 사용되는 oligo dT (dT20)와 random primer (dN6, dN12)의 차이점은 무엇인가요?

dT₂₀ : poly A tail에 binding하며, mRNA를 cDNA로 합성하고자 할 때 사용됩니다.
dN₆ : RNA의 아무 부위에 무작위적으로 binding하므로 poly A tail이 짧거나 없는 bacteria나 total RNA를 이용한 cDNA합성시 사용됩니다.
dN₁₂ : dN₆보다 길이가 2배 길어 annealing 온도를 높여야 할 때 주로 선택하지만 binding 효율은 떨어집니다.

Oligo dT 나 random primer가 포함된 RT제품군에는 어떤 것들이 있나요?

AccuPower^® CycleScript™ RT PreMix & Master Mix, AccuPower^® RocketScript™ Cycle RT PreMix & Master Mix, AccuPower^® RocketScript™ RT PreMix & Master Mix (RNase H Minus)제품은 oligo dT 혹은 random primer가 포함되어 있습니다. Master Mix 제품의 경우 oligo는 별도의 tube로 제공됩니다. (AccuPower^® RocketScript™ RT PreMix & Master Mix (RNase H Minus) 제품 중 0.2 ml/480T는 dT₂₀만 제공되며, 자세한 사항은 제품페이지의 주문 정보탭에서 확인 가능합니다.)

Oligo dT, random primer는 별도 구매가 가능한가요?

구매 가능합니다.

10X Reaction buffer는 별도 구매가 가능한가요?

구매 불가능합니다.

RT kit 제품 종류를 알고 싶습니다.

AccuPower^® RocketScript™ RT PreMix & Master Mix, RNase H Minus는 Thermostable 제품으로 RNA의 복잡한 2차 구조를 풀어주어 cDNA합성 효율을 높여주고, RNase H의 활성을 제거함으로써 보다 길이가 긴 cDNA 합성(최대 12.5 kb)이 가능합니다.
AccuPower^®CycleScript™ RT PreMix & Master Mix는 자사 특허 기술인 CTRT (Cyclic Temperature Reverse Transcription)이 적용되어 cDNA합성 효율이 높고, Oligo가 포함된 제품으로 RT제품군 중 가장 판매량이 높습니다.

RT와 RT-PCR의 차이점은 무엇인가요?

실험방법에 차이가 있습니다. RT는 cDNA만 합성하는 방법이며(two-step 과정 중 한 단계), RT-PCR은 RNA를 template로 하여 cDNA 합성부터 PCR까지 one-step으로 이어서 진행하는 방법입니다.

RT-PCR 제품 종류를 알고 싶습니다.

RT-PCR 제품 종류는 매우 다양하며, 사용 목적에 따라 다음과 같이 구분할 수 있습니다.

Standard RT-PCR : AccuPower^®RT-PCR PreMix & Master Mix
Multiplex : AccuPower^®RocketPlex RT-PCR PreMix & Master Mix
High sensitivity (Thermostable) : AccuPower^®RocketScript™ RT-PCR PreMix & Master Mix
Long & High efficiency : AccuPower^®RocketScript™ RT-PCR PreMix & Master Mix, RNase H Minus
Low copy RNA detection : AccuPower^®Dual-Hotstart™ RT-PCR PreMix
False positive free : AccuPower^®Dual-HotStart RT-PCR PreMix(with UDG)

제품의 유효기간 확인 방법

일반적으로 PreMix의 유효기간은 -20°C 조건에서 2년, Master Mix의 유효기간은 1년 정도이며, 제품상자의 모래시계 옆 사용기한이 표시되어 있습니다.

miRNA RT가 가능한 제품이 있나요?

miRNA용 primer를 별도로 주문하여 자사 RT제품으로 사용 가능합니다.

CTRT1와 CTRT2의 차이점은 무엇인가요?

둘 다 RNA 2차 구조에 의해 cDNA 합성이 잘 되지 않을 경우 사용하는 방법입니다. CTRT1를 우선 권장 드리며 농도가 낮거나 CTRT1으로 잘 안될 경우에는 CTRT2 방법으로 진행하면 됩니다. CTRT 방법으로도 해결이 되지 않는다면 thermostable 기반의 RocketScript™ 제품을 권장합니다.

cDNA는 어떻게 정량 할 수 있나요?

cDNA 합성 후 product에는 cDNA뿐만 아니라 시약에 포함된 enzyme, dNTP, salt 등이 남아있어 정확한 농도와 순도가 확인이 불가능합니다. 확인하고 싶다면 정제과정을 거쳐야 합니다. 일반적으로 RT 시약에 문제가 없고 실험이 정확하게 진행됐을 경우에는 사용한 RNA의 양과 1:1비율로 cDNA가 합성되며 정제 없이 다음 PCR step을 진행해도 별다른 영향을 미치지 않습니다.

COA 요청

qc@bioneer.co.kr 메일로 구매하신 제품의 Cat. No.와 Lot. No.를 기재하여 보내주시면 메일로 회신해드립니다.

MSDS 요청 드립니다.

홈페이지 제품페이지의 관련 문헌/자료 탭에서 확인 가능합니다.

RT진행 시 RNA는 얼만큼 사용하면 되나요?

매우 적은 양의 RNA도 cDNA로 전환이 가능합니다.일반적으로 사용되는 방법에 따라 1μg의 RNA를 사용하여 cDNA로 합성해서 serial dilution을 통해 테스트 후 적정 사용량을 잡을 것을 권장합니다.

PCR진행 후 dye포함 여부에 따른 전기 영동 방법을 알고 싶습니다.

Tracking dye 포함 제품은 바로 loading이 가능하며, 미포함 제품은 loading dye를 추가해서 loading해야 합니다.

RT이후 cDNA의 농도 및 퀄리티는 어떻게 확인할 수 있나요?

RT mixture에 포함된 enzyme, dNTP등으로 인해 agarose gel, nano-drop 측정법은 정확하지 않습니다. 따라서 PCR/qPCR을 통해서 확인해야 하며, cDNA mixture 원액을 template로 사용할 경우 PCR reaction volume의 최대 10% 사용을 권장합니다. 그 이상을 사용할 경우 mixture 구성물질로 인해 PCR inhibition이 있을 수 있습니다.

RNase H가 무엇인가요?

RNase H는 DNA-RNA 혼성 가닥에서 RNA를 분해하는 효소입니다. RNase 활성이 너무 강하면 cDNA를 합성하는 동안 RNA를 제거하여 길이가 긴 product 합성을 저해할 수 있습니다.

RT-PCR제품 사용하여 RT만 진행하는 것도 가능한가요?

One-step으로 모든 조성이 최적화되어 있으므로 two-step으로 진행 시 효율이 좋지 않을 수 있습니다. Oligo와 template RNA를 넣어서 반응은 가능하나 RT전용 키트보다 효율이 떨어질 수 있기에 개별 제품 구매를 권장합니다.

바이러스의 RNA를 사용한 RT에 적합한 제품을 알고 싶습니다.

바이러스 RNA의 경우, 양이 적기 때문에 RNase H Minus제품군을 추천 드립니다(AccuPower^®RocketScript™ RT PreMix & Master Mix, RNase H Minus).

기타 궁금하신 사항은 sales@bioneer.co.kr 로 문의하여 주시기 바랍니다.