AccuPower® HotStart PCR PreMix (with UDG)

AccuPower® HotStart PCR PreMix(with UDG)는 바이오니아의 enzyme-mediated HotStart 특허기술을 적용하여 반응 특이성과 PCR 증폭효율을 높였으며, uracil DNA glycosylase system을 적용하여 carry-over contamination 및 cross-over contamination 문제를 해결한 제품입니다. 그리고 DNA polymerase, dNTPs, reaction buffer 등 PCR 수행에 필요한 구성성분이 혼합되어 1 회 분량씩 동결 건조되어 있으며, 안정화 물질이 첨가되어 있어 상온 (25°C) 보관할 경우에는 한 달 동안, 냉동 보관 할 경우에는 2년 동안 활성이 안정적으로 유지됩니다.

₩97,000
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K-5050-1-CFG

Features and Benefits

Prevention of Carryover Contamination:
Uracil DNA glycosylase system 적용으로 반복적인 PCR 실험으로 인해 공기 중에 남아있던 산물이 유입되어 나타나는 carryover contamination을 방지합니다. Uracil DNA Glycosylase (UDG)는 DNA 가닥 내 uracil과 deoxyribose간의 N-glycosylic bond를 가수분해 함으로써 uracil이 삽입된 template을 제거합니다. UDG는 PCR cycling 전 37℃에서 2분 반응을 통해 활성화되어, uracil이 들어간 DNA를 제거하므로 공기 중 남아있던 산물의 유입에 의한 carryover 오염을 방지할 수 있으며, PCR cycling 중 고온에서 불활성화됩니다.

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Specificity:
PyroHotStart 기술을 적용하여 비특이 증폭산물 생성을 최소화하고, PCR 반응 효율을 극대화 함으로써 미량의 template DNA를 효과적으로 증폭할 수 있습니다. PyroHotStart 기술은 pyrophosphate와 pyrophosphatase 효소를 이용하여, PCR 반응을 시작하기 전 (zero cycle)에 발생하는 비특이적 반응을 줄여 특이도를 높인 바이오니아 고유의 특허기술입니다. 뿐만 아니라 매 증폭 cycle시 발생하여 PCR 저해물질로 작용하는 PPi를 제거함으로써 반응 효율을 높입니다.

(a) Zero cycle에서 PCR 반응 억제: PCR mixture 제조 후, pre-denaturation 온도에 도달하기 전에 비특이적 반응물이 생성되는 것을 방지하기 위해 PPi를 이용합니다. DNA polymerase가 활성을 갖기 위해서는 Mg2+ 이온이 필요한데, mixture에 첨가되어 있는 PPi는 Mg2+ 이온과 높은 친화력을 갖기 때문에 Mg2+ 이온을 붙잡아 둠으로써 PCR 반응을 억제합니다.
(b) Denaturation: Mixture에 첨가되어 있는 PPase는 denaturation 단계에서 반응 온도가 올라가면 활성화되어 PPi를 Pi로 분해하여 Mg2+ 이온을 해리시킵니다. 해리된 Mg2+ 이온은 DNA polymerase에 결합하여 PCR 반응을 진행할 수 있도록 enzyme을 활성화 합니다.
(c) Annealing & Extension: 활성화된 DNA polymerase는 PCR cycle이 진행됨에 따라 target DNA를 증폭합니다.

Ease-of-Use:
각각의 PCR tube에 DNA polymerase와, PCR 수행에 필요한 모든 구성 성분이 포함되어 있어 template DNA, primer set, D.W.만 넣어 바로 PCR 반응을 수행할 수 있습니다. 또한 전기 영동 시에 필요한 tracking dye와 침강제가 포함되어 있어 sample loading buffer를 추가로 넣을 필요가 없으므로 간편하게 사용할 수 있습니다.

Stability:
PCR 반응 혼합물에 안정화제를 첨가하여, -20℃에서 2년까지 효소 활성이 안정적으로 유지됩니다.

Reproducibility:
ISO 9001 품질 시스템 하에서 one-batch system으로 대량 생산되어 각 batch에 대한 철저한 QC를 거쳐 재현성있는 실험 결과를 제공합니다.

Specifications

Enzyme: Top DNA polymerase
5' to 3' exonuclease activity: No
3' to 5' exonuclease activity: No
3' – A overhang: Yes
Fragment Size: Up to 12 kb


Applications

gDNA template PCR
Low-copy target PCR
Multiple primer pairs PCR
cDNA template PCR
Molecular diagnosis

Experimental data



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Figure 1. Comparison of specificity between AccuPower® HotStart PCR PreMix and HotStart PCR PreMix (with UDG).

Specificity test was operated using 7 pairs of primer targeting P53 gene. Reaction mixture was incubated at 37°C for 2 min followed by 95°C for 5 min, 30 cycles of 20 sec at 95°C, 40 sec at 55°C, 1 min at 72°C. AccuPower® HotStart PCR PreMix (with UDG) contains dUTP besides dATP, dGTP, dCTP and dTTP. The amount of DNA (human) used to test is 10 ng and size of PCR amplicon size each lane is represented below.

Lane 1: 139 bp
Lane 2: 211 bp
Lane 3: 447 bp
Lane 4: 618 bp
Lane 5: 1082 bp
Lane 6: 1296 bp
Lane 7: 1561 bp
M: 100 bp plus DNA ladder (Bioneer Cat. No: D-1030-1)



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Figure 2. Comparison of sensitivity between AccuPower® HotStart PCR PreMix and AccuPower® HotStart PCR PreMix(with UDG).

Sensitivity test was operated using serial diluted human genomic DNA. Reaction mixture was incubated at 37°C for 2 min followed by, 95°C for 5 min, 30 cycles of 20 sec at 95°C, 20 sec at 55°C, 30 sec at 72°C. AccuPower® HotStart PCR PreMix(with UDG) contains dUTP besides dATP, dGTP, dCTP and dTTP. The amount of DNA used to test is represented below.

Lane 1: 10 ng of human genomic DNA
Lane 2: 1 ng of human genomic DNA
Lane 3: 100 pg of human genomic DNA
Lane 4: 10 pg of human genomic DNA
M: 100 bp plus DNA ladder (Bioneer Cat. No: D-1030-1)


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Figure 3. Comparison of amplification quality using PCR products (not including uracil base) between AccuPower® HotStart PCR PreMix and AccuPower® HotStart PCR PreMix (with UDG).

Amplification quality test was operated using serial diluted PCR products not including uracil base. AccuPower® HotStart PCR PreMix was also tested for negative control. Reaction mixture was incubated at 37°C for 2 min followed by 95°C for 5 min, 30 cycles of 20 sec at 95°C, 20 sec at 55°C, 30 sec at 72°C. AccuPower® HotStart PCR PreMix (with UDG) contains dUTP besides dATP, dGTP, dCTP and dTTP. The copy number of PCR products used to test are represented below.

Lane 1; 1011 copy 
Lane 2; 1010 copy
Lane 3; 10copy
Lane 4; 10copy 
Lane 5; 10copy
Lane 6; 10copy
Lane 7; 10copy
Lane 8; 10copy 
Lane N; No template control
M; 100 bp plus DNA ladder (Bioneer Cat. No: D-1030-1)


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Figure 4. Efficiency of uracil DNA glycosylase using PCR product (including uracil base).

Efficiency test of uracil DNA glycosylase was operated using serial diluted PCR products including uracil base. AccuPower® HotStart PCR PreMix was also tested for negative control. Reaction mixture was incubated at 37°C for 2 min followed by 95°C for 5 min, 30 cycles of 20 sec at 95°C, 20 sec at 55°C, 30 sec at 72°C. AccuPower® HotStart PCR PreMix (with UDG) contains dUTP besides dATP, dGTP, dCTP and dTTP. The copy number of PCR products used to test are represented below.

Lane 1; 1011 copy 
Lane 2; 1010 copy
Lane 3; 10copy
Lane 4; 10copy 
Lane 5; 10copy
Lane 6; 10copy
Lane 7; 10copy
Lane 8; 10copy 
Lane N; No template control
M; 100 bp plus DNA ladder (Bioneer Cat. No: D-1030-1)




Cat. No. Product Description Price
K-5050-1 AccuPower® HotStart PCR PreMix (with UDG), 0.2 ml thin-wall 8-strip tubes with attached cap / 96 tubes ₩97,000
K-5051-1 AccuPower® HotStart PCR PreMix (with UDG), 0.2 ml thin-wall 8-strip tubes with attached cap / 480 tubes ₩364,000

























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