ExiProgen™ EC Protein Synthesis Kit

ExiProgen™ EC Protein Synthesis Kit는 ExiProgen™ 장비에서 단백질을 합성할 수 있는 제품입니다. Template DNA 를 첨가한 kit를 ExiProgen™에 장착한 후, Protocol no. 902 를 가동시키면 6시간 내에 전자동으로 단백질을 발현하고 발현된 목적단백질을 His-tag를 이용하여 정제합니다. 1회 반응으로 최대 16종의 서로 다른 단백질을 고순도로 얻을 수 있으며, 실험 환경에 따라서 상이한 결과를 얻을 가능성이 있는 매뉴얼 방법과는 달리 재현성 높은 결과를 얻을 수 있습니다.

₩650,000
In stock
SKU
K-7300-CFG

Features and Benefits

  • Fully Automatic DNA-in-Protein-out: 1~10 µg DNA를 kit와 함께 ExiProgen™에 장착한 후 가동시키면 전자동으로 약 6시간 이내에 고순도의 단백질을 얻을 수 있습니다.
  • High Performance: 본 kit는 기존의 cloning으로 생산이 불가능한 세포 독성을 갖는 단백질의 합성도 가능합니다.
  • High Purity and High Yield: 각각의 반응well당 순도 90% 이상의 단백질을 100 μg 내외로 얻을 수 있습니다.
  • Reproducibility: Template DNA만 첨가하면 원하는 단백질을 손쉽게 얻을 수 있어 재현성이 높습니다.

실험 방법 및 원리

ExiProgen™ Protein Synthesis Kit는 다양한 단백질을 효과적으로 합성시킬 수 있도록 최적화된 reagent와 합성된 단백질의 정제를 위한 reagent 및 Ni-NTA magnetic bead로 구성되어 있습니다. Recombinant plasmid DNA로부터 합성된 타겟 단백질은 Ni-NTA magnetic bead에 의해 수집된 후 세척 용액에 의해 세척되어 고순도의 단백질로 정제됩니다.

ExiPrep16Plus



본 제품은 단백질 발현 및 정제방법을 자동화 장비에 적용시킨 키트로서, 그 원리는 아래의 그림과 같습니다.


Principle of protein synthesis with ExiProgen

Upper panel: Manual method of protein expression/purification – sequential and tedious
Lower panel: Automated method of protein expression/purification – simply add DNA and press start!

Template DNA

ExiProgen™ EC Protein Synthesis Kit 의 발현을 위한 Template DNA는 "T7 Promoter – Ribosomal biding site (RBS) – Target gene – T7 terminator "의 구조를 가지고 있어야 하며, 이 중Target gene은 start/stop codon과 정제를 위한 Histidine-tag (N-terminal 또는 C-terminal)를 포함하고 있어야 하며, 그 구조는 아래와 같습니다.



Protein Maximization
기본적으로 6~10 ug/well의 DNA를 첨가하면 단백질이 합성되나, 각 DNA별로 최적 발현을 나타내는 적정 농도가 다릅니다. 따라서 단백질 합성양을 최대화 하기 위해서는 각 DNA별 최적 농도를 찾아야 하며, 이를 위해서는 아래와 같은 실험을 선행하여야 합니다.



Ex) Poly A polymerase 의 최적 발현 농도 확인 및 ExiProgen을 이용한 단백질 합성

AccuRapid™ Cell-Free Protein Expression Kit 를 이용한 DNA 농도 screening
   DNA 농도별 발현 test 결과, 400ng에서 최대 발현율을 보임

M ; AccuLadder™ Protein Size Marker (Broad), NC ; Negative Control, PC ; Positive Control (CAT),
Lane 1 ~6 (pET-poly A polymerase) ; 50, 100, 200, 400, 600, 800 (ng)

ExiProgen™ EC Protein Synthesis Kit 를 이용한 단백질 합성
위의 실험결과에서 얻어진 DNA농도를 기준으로 하여 16.7배의 DNA(≒ 6.7ug)로 단백질 합성

M ; AccuLadder™M Protein Size Marker (Low),
E ; Expression Sample, P ; Purification Sample

Kit contents and Storage condition

Components Storage condition
Kit-1
(Purification kit)
Cartridge ①  4℃
Disposable filter tip
Manual
Kit-2
(Expression kit)
Cartridge ② -20℃
(Cell extract는 -70℃이하 권장)
Positive control DNA (1.5mL tube)
Cell extract (8 strip tube)
Elution tube and cap

본 제품은 단백질 정제를 위한 "Purification Kit (Kit-1)"와 단백질발현을 위한 "Expression Kit (Kit-2)"로 구성되어 있습니다. 자세하게는T7 RNA Polymerase 와 Ribosome 등을 포함된 Cell extract (8-strip tube), RNA 합성 및 단백질 발현에 필요한 성분을 포함한 Master mix와 DEPC DW가 포함된 Cartridge ②, 그리고 6xHis tagged protein을 정제할 수 있는 Ni-NTA magnetic bead와 buffer가 포함된 Cartridge ① 등이 포함되어 있습니다. (이 중 Ni-NTA magnetic bead는 20% 에탄올에 10% (w/v) 현탁된 상태로 제공 됩니다.)


Experimental Data

1. Protein expression and purification
   - 사용한 DNA 농도: 6 - 10 ug (purity >1.8)
   - Protocol number : 902
   - Total prep time :    - Yield: ~100 ug




Reproducibility : 동일한 시료에 대해서 동시에 16개의 반응을 진행할 수 있으며, 반응 well 사이의 편차가 없습니다.

Figure 1. Expression and purification of CAT. Reproducibility is seen in all 16 wells with no detectable variation between wells.
Lane 1~16 : Number of the well,
M : AccuLadder™ Protein Size Marker (Low),
E : Expression sample,
P : Purification sample

Flexibility: 다수의 단백질을 동시에 합성할 수 있으며, 순도 90% 이상으로, 최대 100ug 획득할 수 있습니다.

Figure 2. Expression and purification of various proteins. Up to 16 types of proteins can be expressed and purified simultaneously with an average of over 90% purity.
Top of the lane : Name of the protein,
M : AccuLadder™ Protein Size Marker (Low),
E : Expression sample, P : Purification sample

Functionality : 본 키트로 합성한 단백질은 활성을 나타냅니다.

Figure 3. Detection of fluorescence emitted from fluorescent proteins synthesized with ExiProgen™. This result indicates that these synthesized SfGFP, RFP, and AcGFP are functionally active.
Left panel : Color of each protein elution samples detected with naked eyes.
Right panel : Fluorescence from protein elution samples detected with UV illuminator.


Figure 4. Expression and purification of fluorescent proteins.
Top of the lane: Protein name,
Lane M : AccuLadder™ Protein Size Marker (Broad)
Lane E : Expression sample,
Lane P: Purification sample


Figure 5. Expression and purification of DUSP3 (protein tyrosine phosphatase).
M : AccuLadder™ Protein Size Marker (Low),
E : Expression sample,
P : Purification sample

<Activity check>


Figure 6. DUSP3 synthesized with ExiProgen™ has an enzyme activity. DUSP3 phosphatase activity was measured by incubating with 500 uM 3-O-methylfluorescein phosphate (OMFP).
(Reaction buffer : 100 mM Tris-HCl (pH8.2), 40 mM NaCl, 1 mM DTT, 20% Glycerol)

Application Note

ExiProgen™ Application_Fluorescenct proteins

ExiProgen™ Application_High molecular weight protein

ExiProgen™ Application_in vivo protein expression pET vectors


Manual

• Manual_ExiProgen™ EC Protein Synthesis Kit


MSDS

• MSDS_ExiProgen™ EC Protein Synthesis Kit_Binding Washing buffer

• MSDS_ExiProgen™ EC Protein Synthesis Kit_E. coli extract

• MSDS_ExiProgen™ EC Protein Synthesis Kit_Elution buffer

• MSDS_ExiProgen™ EC Protein Synthesis Kit_Master mix


Brochure

ExiProgen™ protein systhesis and nucleic acid extraction system


Quality Assurance

Bioneer is the holder of Quality Management System Certificates for the following standards.

• ISO 9001 – certificate

• EN ISO 13485 - certificate

자주 묻는 질문

Q1. DNA를 첨가한 후, 몇 시간 후 정제된 단백질을 얻을 수 있나요?
일반적으로 6시간 이내에 정제된 단백질을 얻으실 수 있으며, 프로그램을 O/N으로 가동하셔도 됩니다.
Q2. Template DNA는 어떻게 준비해야 하나요?
본 키트에 사용하실 template DNA는 pBIVT vector(EC kit 전용벡터)에 클로닝하여 사용하는 것을 추천 드리며, 기존에 가지고 계시던 일부pET 벡터(ex)pET15b, 22b, 23a, 28b)도 사용가능 합니다. (단, 동일한 pET 벡터의 경우에도, 단백질에 따라서 합성여부가 달라집니다.) 신규 Gene 합성을 원하시는 고객 분께서는 당사의 Gene Synthesis Service (S-2041)를 이용하실 수 있습니다. 또한 Cloning을 원하지 않는 고객 분께서는 PCR template를 이용하실 수 있습니다.
Q3. Template DNA의 양은 얼마를 사용해야 하나요?
본 키트에 사용되는 DNA의 양은 일반적으로 6~10ug을 첨가하시면 단백질 합성이 이루어 지나, 각 DNA마다 단백질이 발현되는 최적조건이 다르므로, 원하시는 고객 분들께서는 당사의 AccuRapid™ Cell-Free Protein Expression Kit로 DNA의 최적 농도를 찾으신 후, ExiProgen™ EC Protein Synthesis Kit를 이용하셔도 됩니다. 이에 대한 자세한 내용은 Technical/Specs을 참조하시면 됩니다.
Q4. Template DNA의 순도 및 코돈 최적화 여부는 단백질의 합성에 영향을 주지 않나요?
본 키트에 사용되는 DNA는 Purity 1.8이상을 권장하며, Plasmid DNA prep 후, PCR purify를 통해서 불순물을 제거하면 단백질 합성양이 증가됩니다. 또한 E.coli 코돈 최적화된 유전자의 경우, 본 키트에서 단백질 합성이 유리합니다.
Q5. 본 키트를 사용할 경우, 단백질 회수량은 얼마나 되나요?
Reaction당 100ug내외의 단백질을 순도 90% 내외로 회수 가능하며, 1회 최대 16개의 sample을 동시에 반응시킬 수 있습니다. 단백질이 발현은 되었으나 정제가 되지 않는 경우가 있는데, 이 경우는 발현된 단백질이 insoluble하거나, 단백질이 3차 구조를 형성하면서 특정말단에 있는 6xHistidine tag가 안으로 말려 들어가서 Ni-magnetic bead에 결합을 하지 못하는 경우로 추정됩니다. 이러한 경우에는 반대편에 6xHistidine tag이 있는 template를 사용하시어 test 하시기를 권장합니다.
Q6. 본 키트로 합성할 수 있는 단백질의 크기는 얼마인가요?
본 키트로 합성 가능한 단백질의 MW 범위는 10~120kDa 입니다.
Q7. 본 키트의 보관온도는 어떻게 되나요?
본 키트는Expression Kit와 Purification Kit로 구성되어 있으며, Purification Kit의 1번 Cartridge는 4℃, Expression Kit의 2번 Cartridge와 E.coli Extract 는 -20 ℃ 에 보관해야 하며, 이 중 E.coli Extract는 -70℃ 보관을 권장합니다.

* 기타 궁금하신 사항은 sales@bioneer.co.kr로 문의하여 주시기 바랍니다.


Cat. No. Product Description Price
K-7300 ExiProgen™ EC Protein Synthesis Kit, 16 reactions ₩650,000
K-7301 ExiProgen™ EC Protein Synthesis Kit, 32 reactions ₩1,100,000
K-7302 ExiProgen™ EC Protein Synthesis Kit, 96 reactions ₩2,700,000

Related Products

Cat. No. Product Description Price
A-5041 ExiProgen™ Inquire
D-2010 AccuLadder™ Protein size marker (Broad), 500 µL ₩134,000
D-2020 AccuLadder™ Protein size marker (Low), 500 µL ₩77,000
K-3030 AccuPrep® Plasmid Extraction Kit 200 reactions ₩120,000
K-3034 AccuPrep® PCR Purification Kit 200 reactions ₩135,000
K-7250 AccuRapid™ Cell-Free Protein Expression kit, 24 reactions ₩150,000
K-7350 pBIVT Vector Set-1, each 5ug ₩200,000
Copyright © 2018 BIONEER CORPORATION. All rights reserved.