ExiProgen™ EC-Tagfree Protein Synthesis Kit (8 reactions)

ExiProgen™ EC-Tagfree Protein Synthesis Kit는 ExiProgen™ 장비를 이용하여 원형 그대로의 단백질을 전자동으로 합성할 수 있는 제품입니다. 목적단백질을 histidine tag이 있는 상태로 발현시킨 후, 이를 제거하여 고순도의 단백질을 얻을 수 있습니다. Template DNA를 첨가한 kit를 ExiProgen™에 장착한 후 가동시키면 하루 만에 최대 순도 95%의 단백질을 얻으실 수 있으며, 최종 목적 단백질은 Storage buffer에 용해된 상태로 회수할 수 있습니다. 본 제품은 단백질의 구조분석이나, 단백질 의약품개발, 항원단백질 합성에 응용될 수 있습니다.

₩990,000
카탈로그 번호
K-7320



Features and Benefits

  • Protein Synthesis without histidine tag 
    Template DNA를 키트의 카트리지에 넣고 카트리지를 ExiProgen™에 장착한 후 가동시키면 전자동으로 단백질을 발현되고, 발현된 목적단백질은 TEV Protease의 처리에 의해서 Histidine tag이 제거된 상태로 회수됩니다. 
  • Fully automatic: DNA-in-Protein (in storage buffer)-out
    목적 단백질은 투석버퍼에 용해된 상태로 회수됩니다. 
  • Parallel Processing and High Purity
    본 키트는 1~8종의 단백질을 동시에 합성할 수 있으며, 순도 95%의 단백질을 얻을 수 있습니다. 



실험 방법 및 원리

본 키트는 당사의 ExiProgen™ EC-Maxi Protein Synthesis Kit와 같이 SECF 법으로 단백질을 대량 발현시키고, 발현된 단백질을 Ni-NTA magnetic bead과 결합시킨 후, 키트에 포함되어 있는 특정 아미노산 서열을 인식하여 자르는 TEV(Tobacco Etch Virus) protease를 처리하여 순수한 목적 단백질을 정제할 수 있는 키트로, 실험방법과 원리는 아래와 같습니다.

위 그림과 같이 Template DNA를 키트에서 제공하는 E. coli extract와 Master mixture와 함께 섞은 후, 이 반응용액을 반응튜브에 넣어줍니다. 그 후 반응튜브를 ExiProgen™ 의 반응블록에 삽입한 후, 나머지 키트를 장착하고 장비를 가동시키면 됩니다. 그 후, ExiProgen™은 전자동으로 SECF 방식으로 단백질을 발현하고 TEV를 통해서 His-tag을 제거하여 순수한 단백질을 얻을 수 있습니다.

Template DNA 구조

본 키트로 단백질을 발현하기 위해서 Template DNA는 아래와 같은 구조로 되어 있어야 합니다.

즉, 5'- 말단에 6xhistidine tag과 TEV site의 서열을 서열을 가지고 있어야 하며, 이 때, TEV site의 아미노산 서열은 아래와 같습니다.


이 서열을 기반으로 합성된 단백질은 정제과정을 마친 후, 최종적으로 목적 단백질 앞에 Glycine(또는 Serine) 아미노산 한 개만을 추가로 가지게 됩니다. X의 위치에는 20개의 아미노산 중 어느 것이나 사용가능하며, Positive control로 제공되는 DNA의 서열은 Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln-Gly을 암호화 하고 있습니다.

Note) 단, 목적단백질의 N-terminal에 다른 아미노산이 있는 경우 발현이 저해되거나, 용해도가 낮아지는 단백질에는 사용이 불가능할 수도 있습니다. 따라서 본 키트를 사용하기 전에 AccuRapid™ Cell-Free Protein Expression Kit(Cat No. K-7250)를 이용하여 발현 스크리닝을 먼저 해보시는 것을 권장합니다.

실험 결과

1. 다양한 크기의 단백질을 동시에 합성 할 수 있으며, 각 단백질 당 200ug 내외로 합성이 가능합니다.


Figure 1. Expression and purification of various proteins.
M; AccuLadder™ Protein Size Marker (Low), 1: Expression sample of pBIVT-TEV-AcGFP
2: His tag-TEV-AcGFP (His tagged sample), 3: AcGFP (His tag-free sample)

Note) 2번 시료는 ExiProgen™ EC-Maxi Protein Synthesis Kit로 합성한 시료로서, 목적단백질 앞에 histidine tag를 가지고 있고 3번 시료는 His-tag이 없는 목적 단백질입니다.

2. 본 키트로 합성된 단백질은 histidine tag이 없는 목적 단백질 입니다.


Figure 2. Data of SDS-PAGE and Western blot with His-tag antibody (tagged protein and tag-free protein)
M; AccuLadder™ Protein Size Marker (Low) (Bioneer, D-2020),
1; DUSP3 (22 kDa), 2; hGH (23 kDa), 3; AcGFP (28 kDa),
E; Expression sample, P ; Purification sample

Note) DUSP3: Dual specificity protein phosphatase 3, hGH : Human growth hormone


Application

본 키트는 목적단백질을 His-tag이 없는 상태로 고순도로 합성할 수 있으므로, 단백질의 구조분석이나, 단백질 의약품개발, 항원단백질 합성에 응용될 수 있습니다.

키트구성 및 보관온도

본 키트는 두 개의 박스에 포장 되어 배송되며, 각 박스의 구성품은 하기와 같습니다.

Kit 1

Cartridge ① 96 well x 1ea 4℃ 보관
Dialysis tube 1 pack (16 ea/pack)
Disposable filter tip 1 pack (8 ea/pack) 실온보관
Protection cover 1 ea

Kit 2

Cartridge ② 96 well x 1ea -20℃ ~ -70℃보관
E. coli extract 8-strip tube (Yellow) x 1 ea
Master mixture 8-strip tube (Violet)  x 1 ea
DEPC D.W. 8-strip tube (White)  x 1 ea
Positive control DNA 1.5mL tube x 1 ea

Cat. No. Product Description Price
K-7320 ExiProgen™ EC-Tagfree Protein Synthesis Kit, 8 rxns ₩990,000






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